高通量AR二聚体分析鉴定雄激素干扰化学物质和代谢物

• ¹计算毒理学与暴露中心(CCTE)，美国

对用于预测雄激素干扰化学物质的流线计算模型的分析显示，测量雄激素受体(AR)辅因子募集/二聚化的分析对于高预测性尤其不可或缺，特别是对于AR拮抗剂。由于用于开发最小分析模型的原始二聚分析方法不再可用，必须建立和评估新的分析方法，作为现有数据支持的1800 +原始化学物质之外的合适替代方法。在这里，我们提出了AR2检测，这是一种稳定的，基于细胞的方法，使用酶互补方法，将NanoLuc荧光素酶酶的两部分结构域融合到人AR中，定量测量配体依赖的AR同二聚体。使用128种已知内分泌活性谱的化学物质，包括43种AR参考化学物质，AR2测定法成功地分类了已知的激动剂(平衡准确度= 0.92)和拮抗剂(平衡准确度= 0.79-0.88)，以及或更好地分类了具有相同或更高估计效能的遗留测定法。对于激动剂(0.94)和拮抗剂(0.85)两种模式，AR2测定法都适用于高通量筛选，具有优秀的鲁棒Z ' -因子(rZ ')。此外，使用建立的mRNA转染方法，在AR2检测中补充了稳健的细胞色素P450 (CYP)代谢。随后对128种化学物质在个体人类CYP酶的存在下进行的重新评估改变了五种化合物的活性，并改变了其他几种化合物的估计效力。这项研究表明，AR2检测非常适合在修订的计算模型中取代以前的AR二聚体检测，以预测母体化学品及其代谢物的AR生物活性。