作者=王Zhibo,谢伊Zachary,李气,王Kunru,米尔斯克利,张老板,赵Bingyu TITLE =评估指南通过农杆菌介导RNA有效性瞬态分析在烟草benthamiana =植物科学前沿》杂志上体积= 14年= 2023 URL = //www.thespel.com/articles/10.3389/fpls.2023.1111683 DOI = 10.3389 / fpls.2雷竞技rebat023.1111683 ISSN = 1664 - 462 x文摘= CRISPR / Cas9-based基因组编辑系统是一个植物遗传改良的有力工具。然而,指导RNA (s)的变量效率(gRNA)代表一个关键限制因素,阻碍CRISPR / Cas9系统的广泛应用于作物改良。在这里,我们使用了农杆菌介导瞬态分析评估的有效性gRNAs编辑基因在烟草benthamiana和大豆。我们设计了一个基于indels灵巧的筛选系统,可以引入CRISPR / Cas9-mediated基因编辑。gRNA绑定序列(23个核苷酸)插入到开放阅读框的黄色荧光蛋白(YFP)基因(gRNA-YFP),这扰乱了YFP阅读框和结果没有荧光信号时,在植物细胞中表达。瞬变co-expression Cas9和gRNA针对gRNA-YFP基因在植物细胞可以恢复YFP阅读框和恢复YFP信号。我们评估五gRNAs针对烟草benthamiana和大豆基因和证实gRNA扫描系统的可靠性。NbWRKY70,有效针对NbEDS1 gRNAs GmKTI1, GmKTI3被用于生成转基因植物,导致预期每个基因突变。而gRNA针对NbNDR1证实了在瞬态分析是无效的。这确实gRNA未能触发目标基因突变在稳定的转基因植物。 Thus, this new transient assay system can be used to validate the effectiveness of gRNAs before generating stable transgenic plants.