全基因组的识别和验证tomato-encoded sRNA作为跨物种的抗真菌毒力基因的目标因素葡萄孢菌
Fangli吴
有黄,
微博金- 重点实验室的植物次生代谢和调节浙江省大学生命科学和医学,浙江科技大学,杭州,中国
最近的证据表明,小rna从一个物种转移到另一个通过跨物种传播和表现出生物活性的受体。在这项研究中,我们关注tomato-derived srna防御中发挥作用葡萄孢菌。生物信息学方法是首先用来确认tomato-encoded srna跨物种的抗真菌目标的因素b .灰质基因。的表达水平一些identifed srna检入b .灰质来华的装置使用中存在的方法。外生的RNA-induced基因沉默分析进行调查srna的抗真菌作用,和目标基因b .灰质抗真菌srna会利用co-expression分析确认。结果表明,共21B.cinerea全身srna丰富被认定为高cross-kingdom调节器的候选人。其中,三个srna包含一个microrna (miR396a-5p)和两个核(siR3和siR14)被选为实验验证和生物测定分析。存在证实,所有这些3 srna诱导番茄叶子的b .灰质感染。相应地,4毒性基因分别为b .灰质的目标这三个srna被抑制。生物测定显示,所有这些3跨物种srna可以抑制的毒性和孢子成双b .灰质。相应地,的编码基因b .灰质针对这些srna也被下调。此外,双链的毒性抑制sRNA被单链sRNA比这更有效。的抑制效率sRNA反对b .灰质随着其浓度的增加增加。我们的研究结果提供了新的病原体和宿主植物共同进化的证据,以及新的方向使用植物的srna控制病原体。
1介绍
葡萄孢菌代表最主要和常见的necrotrophic真菌病原体促进采后腐烂的新鲜水果和蔬菜(Romanazzi Feliziani, 2014)。b .灰质有一个广泛的主机和可以感染超过200个植物物种,导致灰霉病(舒马赫,2012;Kumar et al ., 2020)。相应地,植物也开发有效的策略b .灰质病原体在两个内部免疫系统包括:PAMP时触发免疫(PTI)和eit效应引起的免疫力。PTI和ETI主要使用蛋白质作为行动点数,在微生物相关分子模式(MAMP)病原体或损害相关的分子模式(深度贴图)从植物被用作触发器、和植物受体作为探测器(Duanis-Assaf et al ., 2022)。此外,越来越多的证据表明,ncRNA可以用作移动免疫因素对抗入侵丝状病原体的毒性(真菌和卵菌纲)序列相关的方式。2013年,一项开创性的工作表明,植物真菌病原体b .灰质可以提供sRNA植物细胞,移动真菌sRNA可以加载到植物包含AGO1劫持沉默复杂植物免疫(Weiberg et al ., 2013)。
相反,表达srna瞄准b .灰质(Bc)DCL基因在植物导致成功的沉默BcDCL基因,进而抑制的产生b .灰质srna,这已经被证明能够劫持植物免疫力trans-kingdom的方式(王et al ., 2016)。Cai et al。(2018)成功地转移sRNA从拟南芥来b .灰质通过细胞外囊泡,然后沉默真菌目标基因在活的有机体内。此外,dsrna和小分子rna (srna)目标DCL1和DCL2的b .灰质通过RNA喷涂应用疾病控制(王et al ., 2016;王et al ., 2017;孟et al ., 2020;乔et al ., 2021)。喷涂β2-tubulin dsRNA可以赋予植物抵抗b .灰质(顾et al ., 2019)。涅尔瓦et al。(2020)应用dsRNA目标BcCYP51,Bcchs1,BcEF2抑制b .灰质感染的高压喷涂葡萄藤叶子和采后喷洒的葡萄串,和结果表明,RNA-based方法控制B.cinerea是有效的和环保的(王、金,2017年)。因此,许多系统标识的rna,这将抑制b .灰质毒性感染,对了解植物的抗性机制很重要b .灰质和应用RNA-based控制方法b .灰质。在这项研究中,我们报告的发现和验证tomato-derived srna在基因组宽,可以抑制感染b .灰质。我们的研究结果提供了新的病原体和宿主植物共同进化的证据,以及新的方向使用植物的srna控制病原体。
2材料和方法
2.1数据集
8 sRNA-seq数据集的产生b .灰质来华的番茄从SRA下载数据库根据加入数字(GSM1101912、GSM1101913 GSM1101914, GSM1101915, GSM1101916, GSM1101917, SRR1482408和SRR1463412)。其中,GSM1101912, GSM1101914 GSM1101915分别从生产B.cinerea接种叶在0 h, 24 h和72 hWeiberg et al。(2013),而SRR1482408和SRR1463412从模拟和生产B.cinerea接种番茄在7天(金和吴,2015年)。番茄基因组序列被下载ftp://ftp.solgenomics.net/(版本:build_2.40)。在真菌病原体毒力因素的数据集下载http://sysbio.unl.edu/DFVF/index.php(陆et al ., 2012)。
2.2系统的识别tomato-derived srna定位b .灰质
识别b .灰质堂sRNA西红柿,两sRNA-seq测序的数据集b .灰质接种(TD7d)和mock-inoculated post-inoculation 7天(TC7d)番茄叶(dpi)从NCBI SRA数据库下载数量加入SRP043615 (金和吴,2015年)。每个库的独特序列提取和合并成1 sRNA库sRNA识别;读入两个库都是完全映射到番茄基因组序列但未映射tRNA,核糖体rnaB.cinerea基因组序列提取番茄sRNA。这些独特的原始读计数sRNA被从每个sRNA检索库和规范化读取每百万(RPM)。sRNA序列的最小转速10在每个库中提取不同的表达分析。的调节srna Log2 (TD7d / TC7d) > 1, p值< 0.001b .灰质来华的番茄的候选人被认为是b .灰质全身srna茄。那么这些候选人经sRNA-seq数据集产生B.cinerea现病史接种番茄在24和72年hpi与mock-inoculated番茄Weiberg et al。(2013)。这些B.cinerea全身srna被视为microrna通过与已知序列对齐microrna存入miRBase数据库(Kozomara Griffiths-Jones, 2011)。其余srna视为未知的核。确定的目标基因sRNA包括microrna和siRNAs预测通过psRNATarget服务器对cDNA序列b .灰质(戴和赵,2011)。毒性因素分析了假定的目标通过使用blastp创造价值的参数< 1 e-5身份> 40%,覆盖率> 70%。
2.3植物材料的准备和接种b . cinere
西红柿的种子简历。小汤姆和烟草benthamiana直接被播种的土壤12 h: 12 h光周期在温室~ 22°C。这项工作使用流行的植物。马铃薯葡萄糖琼脂用于的培养b .灰质。分生孢子收集了从枚感染番茄两星期洗两次蒸馏水和调整5×10的浓度6分生孢子/毫升生物测定。基于序列所示表S2,两个单链(ss) srna和双链(ds) srna被GenePharma合成(上海,中国)。每个sRNA在最后添加到分生孢子悬浮液浓度10µM并立即drop-inoculated五烟叶或西红柿的叶子上了好几天。树叶控制与分生孢子接种以同样的方式,但水或-控制(数控RNA, RNA 5′-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3′。没有目标基因b .灰质)。实验重复三次。我们的感染强度进行了分析b .灰质控制和治疗带有sRNA成像和台盼蓝染色法(Woods-Tor et al ., 2018)。
2.4分生孢子萌发化验
分生孢子发芽检测使用玻璃纸地带所描述的方法Bilir et al。(2019)。简单,透明条切成1.5厘米2,由高压消毒,然后放在培养皿的媒体女士和10µL被添加b .灰质分生孢子与sRNA或NC-RNA治疗。孵化后12 h: 12 h光周期22°C,分生孢子在光学显微镜下检查。
2.5总RNA提取和定量rt - pcr(存在)
总RNA提取使用TRNzol-A +试剂(TIANGEN,北京),和纳米下降2000分光光度计用于RNA量化。信使rna逆转录的台阶,sRNA是不同的。信使rna,反转录进行使用PrimeScript RT试剂盒和gDNA橡皮擦(豆类、大连、中国)根据制造商的建议。类似的反应没有逆转录酶作为控制执行确认没有基因组DNA在后续步骤。microrna,我们添加了聚(A)使用大肠杆菌保利(A)聚合酶(内,北京)。3 ' RT-Primer(英杰公司)作为逆转录引物用于以下逆转录根据制造商的协议。
SYBR绿色PCR进行按照制造商的指示(内,北京)。总之,1μL cDNA模板添加到10μL 2 x大师混合(内,北京),和特定的引物和ddH 10μM2O 20μL添加到最后一卷。的反应是pre-denatured 3分钟在94°C,紧随其后的是50个周期94°C的30年代和30年代58°C。所有反应都是一式三份,并控制(没有模板)包括为每一个基因。自动确定阈值周期(Ct)值是使用ABI 7500实时PCR系统(美国)。特异性扩增子的确认是根据融化曲线在每个运行。使用2褶皱变化计算-ΔΔCt方法,2-ΔΔCt= (Ct、目标−Ct、内部)治疗−(Ct、目标- Ct、内部)控制(Livak Schmittgen, 2001)。在这项研究中使用的所有寡核苷酸中列出补充表S5。
2.6载体建设和co-expression miR396a的目标
Pre-miR396a合成然后克隆到pBIN438向量和BamH我和萨尔的互补脱氧核糖核酸序列b .灰质基因的目标miR396a获得使用rt - pcr方法,然后插入到pEarleyGate 100加表达载体CaMV 35 s启动子区域。miR396a-5p目标站点的目标使用重叠PCR基因被删除。随后,突变序列也被插入到pEarleyGate 100矢量表达式由CaMV 35 s启动子驱动的。
瞬时表达实验符合描述的方法孟et al。(2020)。的根癌土壤杆菌应变GV3101与构造转换p35区域:MIR396a p35区域::目标(正常的目标站点),和p35区域::目标μ(目标站点删除)。改变了农样本收集和resuspended渗透介质[10毫米MgCl2, 10毫米MES (pH值5.6),200年μM acetosyringone]与OD600调整为3 - 4 h。大约0.2农渗透进2-week-oldn benthamiana叶子,收获2天后。
2.7统计分析
用SPSS统计软件进行统计分析22.0(美国)。所有的结果都表示为与SDs从三个独立实验的手段。的t以及被选中的P值< 0.05被认为是具有统计学意义。
3的结果
3.1全基因组鉴定tomato-derived srna瞄准b .灰质
两个sRNA-seq数据集被测序b .灰质接种(TD7d), mock-inoculated post-inoculation 7天(TC7d)番茄叶(dpi)从NCBI SRA数据库下载数量加入的SRP043615识别tomato-derived srna瞄准b .灰质(金和吴,2015年)。通过使用10规范化RPM sRNA读取截止,总共1373 sRNA,从20元到24元,被确认在库(表S1)。其中,53 srna被调节b .灰质来华的叶子而mock-infected叶子然后视为b .灰质全身sRNA候选人(表S2)。此外,21 53 srna被调节的b .灰质接种番茄库报告Weiberg et al。(2013)(表S2,表1),但剩下的32 srna无法确认(表S2)。这些21 expression-confirmed srna 6报道作为miRBase microrna,未知,其余15人,贴上siR1-siR15 (表1)。此外,六b .灰质全身srna包括2 microrna (miR156d-5p和miR396a-5p)和四个siRNAs (siR3, siR10、siR13 siR14)是由两个或两个以上的确认b .灰质。治疗报告的数据集Weiberg et al。(2013)(表1)。
表1确认B.cinerea全身sRNA茄sRNA-seq数据集产生B.cinerea现病史接种番茄在24和72年hpi与mock-inoculated番茄Weiberg et al。(2013)。
我们确定潜在的目标基因的21b .灰质全身srna硅片和关注那些与真菌毒力相关的因素来理解这些srna cross-kingdom的角色。结果表明,总共有149记录b .灰质被确定为假定的目标psRNAtarget使用默认参数(http://plantgrn.noble.org/psRNATarget/)(表S3)。通过搜索数据库真菌病原体的毒力因子,我们发现高82记录21 srna共享的目标序列相似性与63年毒力因素,来显示他们的潜在的角色的致病性b .灰质(表S4)。此外,13记录被九srna目标,即miR396a-5p, miR482b, siR2, siR3, siR5, siR8, siR9, siR14, siR15,参与“灰色模具”(表2)。成绩单是剩下的12 srna的目标,即miR157a-5p, miR156d-5p, miR5300, miR396a_3p, siR1, siR4, siR6, siR7, siR10, siR11, siR12 siR13,据报道,在其他真菌病原体毒力因素。
表2srna的目标基因与灰色的模具。
3.2表达模式b .灰质全身srna及其目标基因
确认这些发现srna诱导的表达b .灰质6 srna (miR156d-5p miR396a-5p、siR3 siR10, siR13和siR14)由两个或两个以上的其他支持b .灰质处理数据集被选来衡量他们的表达模式b .灰质在24小时内接种番茄叶子post-inoculation (hpi)使用定量逆转录聚合酶链反应(存在)。结果表明,所有的这些srna调节b .灰质来华的番茄叶与mock-treated叶子除外miR156d-5p(图1一个),显示一致的表达模式与sRNA-seq数据集(Weiberg et al ., 2013;贾et al ., 2015)。这些5b .灰质全身srna,只有3 srna可能目标四毒力因子的编码基因的灰霉病病,包括Bcin15p02590.2和Bcin04p04920.1的目标miR396a-5p,Bcin04p03120.1的目标siR3和Bcin01p06260.1的目标miR14(表2)。因此,这四个编码基因的表达模式也被调查b .灰质接种马铃薯叶子上间隔与掌上电脑板的使用中存在。结果表明,所有这四个目标被抑制(图1 b),显示srna -监管。
图1表达式的分析B.cinerea诱发srna及其目标。(一)表达式的srna水平灰霉病菌接种叶与叶mock-inoculated番茄。(B)4编码基因的表达水平3 srna的目标灰霉病菌长在番茄叶片间隔长在PDA板块。星号显示显著差异(∗P < 0.05)。
3.3抗真菌的活动b .灰质堂srna
证据表明,外生RNA-induced基因沉默(ERIGS)是一种有效的方法来控制灰霉病疾病增加b .灰质靶向srna (王et al ., 2016;王et al ., 2017;孟et al ., 2020;乔et al ., 2021)。因此,我们使用ERIGS测试抗真菌的活动这三个跨物种srna反对b .灰质。这三个跨物种srna (miR396a-5p siR3和siR14)分别被添加到b .灰质分生孢子解决方案的最终浓度10μM然后drop-inoculated至少6烟叶为3天。结果表明,坏死的平均直径达到~ 11毫米b .灰质接种叶与水或数控RNA治疗(图2 a, B)。sRNA-treated的叶子b .灰质比模拟,三srna小坏死治疗(图2一个)。其中,siR14几乎坏死(4.1毫米)直径,其次是miR396a-5p(5.8毫米),其余siR3有着相似的坏死(~ 7.5毫米,直径图2 b)。相应地,毒力因子的编码基因(Bcin15p02590.2和Bcin04p04920.1)的目标miR396a-5p明显衰减b .灰质被miR396a-5p,但没有表情的变化b .灰质被其他两个srna (图2汉英)。相似的表达Bcin04p03120.1siR3的目标和Bcin01p06260.1siR14只有抑制在的目标b .灰质分别被siR3和siR14 (图2汉英)。这些结果表明这三个srna控制灰霉病病毒力基因的定位b .灰质。
图2抗真菌的活动tomato-derived srna。(一)烟叶是接种灰霉病菌分生孢子含有tomato-derived srna。(B)直径对烟叶的坏死。(一部)4编码基因的表达分析3 srna目标灰霉病菌分别对待miR396a-5p, siR3 siR14。结果表示为±SD 3生物复制的方法。星号显示显著差异(* P < 0.05),而相应的NC-RNA治疗。
3.4 srna抑制孢子萌发
证据表明,添加外源srna可以抑制病原真菌的孢子萌发,因此感染诱导RNAi通路(Bilir et al ., 2019;孟et al ., 2020)。因此,发芽试验进行24 h, 48 h和72 h理解3 srna分生孢子萌发的影响b .灰质。结果表明,大部分的孢子孵化成功NC-RNA发芽和菌丝生长良好在24小时内,但孢子对待这些3 srna (miR396a-5p, siR3和siR14)未能发芽(图3)。这些结果表明,RNA对孢子萌发有明显的抑制作用灰质。
图3发芽的化验灰霉病菌分生孢子被tomato-derived srna。
3.5影响sRNA浓度抗真菌的活动
miR396a-5p具有中等抗真菌活性的三个sRNA在后续试验中选择了sRNA浓度的影响。miR396a-5p添加的分生孢子的解决方案b .灰质最终的浓度5、10、20μM,然后接种到烟叶为4天。对单站sRNA miR396a-5p 5μm有坏死(13毫米)直径最大;其次是10μm;miR396a-5p处理20μM最小坏死(8毫米)(图4 a, C)。这些结果表明,高浓度的sRNA具有更好的反B.cinerea活动。一个类似的结果是双链miR396a-5p观察(图4 b, C)。这些结果表明,抑制双链miR396a-5p (ds-miR396a-5p)是更有效的比单链miR396a-5p (ss-miR396a-5p) (图4 c)。此外,抗真菌活性ds-miR396a-5p也调查了通过接种番茄叶分生孢子的解决方案b .灰质10嗯ds-miR396a-5p。结果表明,坏死区b .灰质的价格相比显著降低在ds-miR396a-5p-treated叶子数控RNA-treated树叶(图5),表现出很强的抗真菌活性。
图4在毒性抑制miR396a-5p浓度的影响。烟叶注射灰霉病菌分生孢子含有5μM 10μM和20μM ss-miR396a-5p。部分坏死被台盼蓝染色方法。B)烟叶接种灰霉病菌分生孢子含有5μM 10μM和20μM ds-miR396a-5p。部分坏死被台盼蓝染色方法。在烟叶C)直径的坏死。结果表示为±SD 3生物复制的方法。
图5抗真菌的活动miR396a-5p茄叶三个分支。番茄叶片接种灰霉病菌分生孢子含有20μM ds-miR396a-5p和数控RNA。
3.6验证b .灰质基因的目标miR396a-5p
了解反b .灰质执行机制,瞬态co-expression来验证两种b .灰质编码基因的目标miR396a-5p由psRNAtarget预测(表2,表S3)。我们首先构建了两种类型的目标基因向量,含有目标站点或缺乏一个目标站点,进一步验证miR396a-5p确定目标(图6)。目标构造pre-miR396a瞬变发生在一起n benthamiana。如控制,每个两个野生型目标结构也是暂时性的表达n benthamiana。与控制的瞬态表达相比,的相对表达水平Bcin15g02590.2和Bcin04g04920.1没有miR396a-5p目标站点没有co-expression pre-miR396a(紧图6 b)。然而,成绩单的水平Bcin15g02590.2和Bcin04g04920.1包含一个目标站点时显著降低与pre-miR396a中的(图6 b)。结果表明,这两种毒力基因的b .灰质可能被miR396a负调控。
图6miR396a的验证目标基因的瞬时表达。(一)超表达向量构造miR396a-5p及其2目标基因灰霉病菌(Bcin15g02590.2和Bcin04g04920.1)。灰色的小三角形:指目标站点的删除。(B)相对转录水平的基因与miR396a-5p中的目标n benthamiana。结果表示为±SD 3生物复制的方法。星号显示显著差异(* P < 0.05),而相应的野生型目标基因的瞬时表达。
4讨论
新兴证据支持rna可以作为跨物种传播效应物从低营养级的食物链和展览在高营养级生物活性(江et al ., 2012;汉和烹调的菜肴,2015;Zhang et al ., 2012;张H et al ., 2016;曾庆红等人。,2019年)。除了研究srna从高营养级转移到低营养级的食物链和生物活动,展览Zhang et al。(2016)发现cotton-derived microrna的目标诉dahliae毒力基因。相同的现象在我们先前的研究发现tomato-derived miR1001可以跨物种抑制的生长和毒性b .灰质(孟et al ., 2020)。在这项研究中,我们进行了全基因组鉴定屏幕tomato-derived srna作为植物的跨物种抑制剂b .灰质。总共有21 srna确定为跨物种抑制剂的候选人。其中3 tomato-derived srna,即miR396a-5p、siR3 siR14,显示角色的跨物种的监管b .灰质毒性。对于这些3 srna,总共四个毒力基因预测的目标包括腺苷酸环化酶、硫胺生物合成蛋白质,几丁质合酶和双组分组氨酸激酶(表2)。证据表明,腺苷酸环化酶的突变体(刘et al ., 2012),硫胺生物合成蛋白(刘et al ., 2022)、几丁质合酶(Zhang et al ., 2016)和双组分组氨酸激酶(Zhang et al ., 2010)将大大降低的致病性病原体。因此,我们建议这三个srna抑制致病性毒性基因的定位b .灰质。此外,我们还研究内源性基因的作用在植物的目标这三个抗真菌srna (表S6)。结果表明,大量的编码基因可以通过这三个目标sRNA西红柿,和大多数的内源性目标有关植物生长和发展和压力承受力。例如,总共有178个编码基因预测miR396a-5p的目标。先前的研究表明,miR396a守恒的信使rna是一个工厂,主要调节植物叶片的生长和发育针对平家人。此外,miR396a还可以调节的表达bHLH74参与调节的发展,叶缘形状和根(陈et al ., 2015;陈et al ., 2017;Chandran et al ., 2019)。有趣的是,研究发现,过度的miR396a减少植物对病原菌的抗性(陈et al ., 2015)。在这项研究中,我们发现的外源性应用miR396a可以抑制的毒性b .灰质。因此,我们推测植物致病性srna诱导的表达b .灰质帮助他们成功地感染宿主植物。相反,以抵消这种病原体的入侵模式,主机可能运输这些诱导致病srna病原体削弱的作用在植物和病原srna抑制病原体的毒性。
我们认为low-abundance srna几乎在跨物种基因调控中发挥自己的作用,因为他们很难运输受体物种或受体物种的丰度极低发挥相应的作用。贾庆林et al。(2015)发现蚕的桑树miR166b非功能性cross-kingdom基因调控。林et al。(2019)还提到cross-kingdom microrna在受体发现物种的丰度应与microrna的原始物种丰富,除非特定microrna是高度稳定或优先吸收动物(Zhang et al ., 2012)。然而,阅读数miR162a是相对较高的h .幼虫并显示显著的正面效应cross-kingdom基因调控(朱et al ., 2017)。这个概念和sRNA-seq数据基础上,我们选择了tomato-derived sRNA候选人的最低转速10茄,对应于原始读取> 140。
Bilir et al。(2019)表明,外生长串srna (ss-sRNAs)和双链srna (ds-sRNAs)可以吸收孢子和RNA与靶基因结合形成复合物和抑制靶基因的表达。比ss-sRNA Ds-sRNA更有效。在这项研究中发现了类似的现象。当ss-miR396a-5p或ds-miR396a-5p结合的孢子b .灰质,无论是srna可以抑制感染b .灰质。此外,ds-sRNA比ss-sRNA更有效。原因可能在于ds-sRNA绑定与RISC效率高于ss-sRNA。马丁内斯et al。(2002)透露,RISC形成在低浓度的检测不到ss-sRNA但可以发现即使在1 nmol / L ds-siRNA的浓度。Holen et al。(2003)表明,过度的ds-siRNA ss-sRNA竞争性堵塞。利马et al。(2009)发现核是更有效的比ssRNA约束力的帽子。
数据可用性声明
最初的贡献提出了研究中都包含在这篇文章/补充材料。进一步询问可以针对相应的作者。
作者的贡献
弗兰克-威廉姆斯和WBJ构思和设计研究。弗兰克-威廉姆斯,YH WQJ组织和执行实验。弗兰克-威廉姆斯和WBJ分析了数据和写的手稿。所有作者的文章和批准提交的版本。
资金
这项工作得到了中国自然科学基金的资助(32172496)、浙江省自然科学基金(LY21C140004),和521年浙江科技大学的人才基础。
确认
我们感谢黄迪奥生物测定分析技术援助。
的利益冲突
作者声明,这项研究是在没有进行任何商业或财务关系可能被视为一个潜在的利益冲突。
出版商的注意
本文表达的所有索赔仅代表作者,不一定代表的附属组织,或出版商、编辑和审稿人。任何产品,可以评估在这篇文章中,或声称,可能是由其制造商,不保证或认可的出版商。
补充材料
本文的补充材料在网上可以找到:https://www.雷竞技rebatfrontiersin.org/articles/10.3389/fpls.2023.1072181/full补充材料
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关键词:tomato-derived sRNA,跨物种的监管,RNAi毒性抑制,灰质
引用:江黄吴F, Y, W和金W(2023)全基因组的识别和验证tomato-encoded sRNA作为跨物种的抗真菌毒力基因的目标因素葡萄孢菌。前面。植物科学。14:1072181。doi: 10.3389 / fpls.2023.1072181
收到:2022年10月17日;接受:2023年1月18日;
发表:2023年2月02。
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