(¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1:一个新宠物分子成像的放射性示踪剂N-cadherin-positive肿瘤

1介绍

肿瘤侵袭转移是肿瘤恶化的关键过程和与不良预后相关。近年来,越来越多的研究发现,大多数肿瘤的转移取决于epithelial-mesenchymal过渡(EMT) (1- - - - - -4)。EMT是一个生物进化的过程表现为上皮细胞失去上皮特性和获得间充质属性(5)。EMT的过程伴随着上皮钙粘蛋白(钙)下调和随之而来的老年病的神经钙粘蛋白(N-cadherin) (6- - - - - -9)。负N-cadherin N-cadherin的转染肿瘤细胞表达导致更高的攻击性,而细胞间粘附由上皮消失了,和钙粘蛋白的表达明显减少(10,11)。N-cadherin缺席或低表达在正常上皮细胞,和N-cadherin的异常表达与上皮恶性肿瘤如乳腺癌、前列腺癌和uroepithelial癌(12,13)。考虑N-cadherin高表达的肿瘤,它可以是一个很好的目标肿瘤治疗和诊断。控制肿瘤转移和减少耐药通过抑制N-cadherin可能是一种有效的治疗策略(14,15)。五胜肽ADH-1 N-cadherin抑制剂(12,16- - - - - -19),具体结合N-cadherin通过疏水和静电相互作用,涉及Trp2残基之间的相互作用的结合位点N-cadherin的Ala片段ADH-1分子(20.)。应用ADH-1肿瘤可导致肿瘤血管angiolysis和细胞凋亡(21- - - - - -23),但不损害正常成熟的血管(22,23)。ADH-1和美法仑在小鼠黑色素瘤的治疗探索,这大大降低了肿瘤的生长。其效果与单独的30倍剂量的美法仑(23)。增强的回应的ADH-1美法仑与肿瘤细胞凋亡增加,增加了DNA加合物的形成,改变了细胞内信号。临床实验调查ADH-1(阶段1和阶段2单研究)显示抗癌活性N-cadherin-positive肿瘤患者(17,24)。

作为一个新兴领域,分子成像吸引了大量关注和近年来发展迅速。小肽或小分子的结合与正电子核素标记可以作为新的功能性分子探针成像(25)。开发一个分子探针定位N-cadherin N-cadherin的非侵入性成像在活的有机体内具有潜在应用价值在肿瘤诊断、药物开发、治疗剂量优化和监控。在这项研究中,一种新的宠物探测器(¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1准备利用ADH-1肽和的可行性¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1 N-cadherin阳性肿瘤检测的探索。

2材料和方法

2.1一般

背板是购买的大环的公司;保护氨基酸,多肽合成试剂,和树脂从南昌tanzhenbio有限公司有限公司;无水氯化铝(AlCl₃)和醋酸钠是购自阿尔法蛇丘(中国)化学有限公司,有限公司;和三氟乙酸(组织)获得了从上海阿拉丁生化科技有限公司(中国)。试剂,包括磷酸盐(PBS)和细胞培养基,从Sigma-Aldrich获得。胎牛血清(的边后卫)从生物产业(BI)购买公司。所有试剂和溶剂是商业产品,使用前未经纯化。西门子回旋加速器生产(¹⁸F]氟化物通过轰击[¹⁸O H]₂O目标12.5兆电子伏质子。分析高效液相色谱法(高效液相色谱)是安捷伦1200系统上执行反相柱(安捷伦Zorbax ODS, 250×4.6毫米)。质谱得到q - t的一个总理UPLC系统配有电喷射接口(ESI)(水域,美国)。γ-counter (CAPRA-R Capintec公司,拉姆齐,新泽西,美国)是用来测量辐射值的生物分布的实验。小动物成像进行了使用micro-PET / CT扫描仪(西门子Inveon复合式系统,德国)。

2.2合成肽

方案1描述了多肽合成的固相合成方法(26)。肽的纯度,包括NOTA-ADH-1 Cy3-ADH-1,确定了高效液相色谱法(HPLC),和分子量被质谱鉴定。冷冻干燥后他们储存在-20°C。

2.3细胞结合的研究

人类结肠癌SW480癌和胰腺癌BxPC3细胞系是购买从生物化学和细胞生物学研究所,上海生物科学研究所和中国科学院。特定绑定的研究评估SW480和BxPC3肿瘤细胞。SW480和BxPC3细胞培养中含有高与胎牛血清葡萄糖和补充谷氨酰胺,penicillin-streptomycin,培养基是改变了每隔一天。细胞组织培养中被扩展锅调湿空气中含5%二氧化碳在37°C和分离胰蛋白酶和磷酸盐进行进一步的细胞培养时,细胞汇合的。

评估结合肽的能力,Cy3-ADH-1肽合成。同等数量(1×10⁵)的SW480和BxPC3细胞被播种在6-well盘子。隔夜孵化后,0.5毫升的培养基和0.5毫升的浓度5μM Cy3-ADH-1解决方案,20μM 50μMμM 100和200μM被添加到细胞室在黑暗中,分别在37°C和孵化有限公司5%₂孵化器了半小时。随后,6-well板块被丢弃的解决方案,并与多聚甲醛固定细胞10分钟。与PBS三次洗涤后,这些细胞被安装在安装介质包含DAPI 15分钟,然后由奥林巴斯IX71可视化荧光显微镜(日本奥林巴斯)。

竞争结合试验进行SW480肿瘤细胞。因此,1×10⁵SW480细胞被置于3板和0.5毫升的无标号ADH-1解决0μM 50μM, 200μM浓度添加到每个在37°C,孵化绑定缓冲。30分钟后的反应,0.5毫升10μM Cy3-ADH-1的解决方案是添加在绑定缓冲然后孵化37°C为另一个1小时,使荧光标记多肽和过度非标签的多肽与肿瘤细胞结合。细胞被洗3次,每次1毫升PBS溶液5分钟,安装在安装介质包含DAPI 15分钟。的吸收强度结肠癌SW480细胞荧光标记多肽由荧光显微镜观察和测量。

2.4准备的¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1

方案2介绍了辐射合成常规的¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1 (27- - - - - -31日)。100 ug NOTA-ADH-1溶解在2毫升axygen在离心管400 ul纯水;间变性大细胞淋巴瘤引起₃(26.0 nmol;13.0μL;2.0毫米)在乙酸钠缓冲溶液(pH值4;0.2米)和1毫升乙腈加入反应器中,铝和混合好。500年μl¹⁸F目标水(1000 - 1500 mci)添加到反应堆在100°C和加热10分钟;5 ul的原油产量点采集样本进行薄层色谱法(TLC)检测。剩余的原油产品略冷却,然后转移到前提HLB筒与15毫升水和洗10毫升PBS和20毫升水,分别。2.0毫升的产品终于筛选了乙醇和水的比例1:1 (V / V),使用无菌过滤f我ltration膜,在接收瓶收集。产品(310 - 500 mci)然后稀释成解决方案包含5%的乙醇使用生理盐水注入,为质量控制和采集标本。

2.5确定放射化学纯度

放射化学的产量是由薄层色谱监测(50%乙腈)和放射化学纯度经高效液相色谱使用Zorbax ODS (C18) 4.6 * 250 mm分析列。包括高效液相色谱的流动相,0.1%的乙腈溶液三氟乙酸(组织)和B阶段,组织0.1%的水溶液中。移动阶段进行进行梯度洗脱。阶段A比B阶段(0分钟是10%:90%,逐步上升到70%:30%,20分钟,保持在1毫升/分钟的流量。

2.6在体外稳定的决心

的稳定性(¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1测试在PBS和牛血清。总之,3.7兆贝可(¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1用移液器吸取到0.5毫升的PBS和孵化PBS在室温或牛血清37°C。在这项研究中,一个整除的解决方案是直接在1、6和8 h后孵化,放射化学纯度由radio-TLC或radio-HPLC在相同的条件下决定。

2.7 Lipid-water分配系数

的分配系数¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1在1-octanol衡量评估放射性物质的分布和磷酸盐缓冲2毫升离心管。20µl [¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1的解决方案是添加到包含0.5毫升每个1-octanol和PBS管。混合物是涡和离心机(5000 r / min) 5分钟。共有2从每一层(50μL)收集的样本,化验γ计数器。分区系数(日志Po / w)显示为1-octanol日志数量与PBS层(n = 3)。

2.8肿瘤植入老鼠

动物实验都是依照执行和批准的机构动物保健和使用委员会的指导方针的浙江大学医学院第一附属医院。BALB / c小鼠ν/ν(女,20±3 g, 4 - 6周;实验动物科学、浙江大学)被用于这项研究。SW480和BxPC3异种移植生成的,5×10⁶肿瘤细胞皮下注入女性无胸腺的裸体小鼠的侧翼。PDX-bearing鼠标模型建立如下。胰腺癌(诊断为胰腺导管腺癌)组织了手术的67岁高龄的女病人。从患者获得书面知情同意,批准的研究协议第一附属医院临床研究伦理委员会的浙江大学医学院。样品被切割成大约1毫米³消失,肿瘤组织的是皮下植入BALB / c小鼠ν/ν侧翼。老鼠被允许自由进入无菌水和食物和保持严格的无病的情况下,控制温度(~ 25°C)、湿度(50 - 70%)和昼夜节律(12小时光/暗周期)。所有必要的程序进行,以减少不适,避免动物的浪费。肿瘤的长度和宽度测量每隔一天。Biodistribution在老鼠进行研究和正电子发射断层扫描肿瘤体积达到150 - 200毫米³。

2.9 Biodistribution正常小鼠

三十SPF昆明小鼠称重18-20g被随机分成6组(n = 5)。如上所述,¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1纯化和分离的高效液相色谱分析。每个老鼠注射一剂量的0.74兆贝可通过尾静脉(20μci)。血液收集从轨道上,老鼠牺牲,和大脑、心脏、肺、肝、脾、肾、胃、肠、肌肉、骨骼和其他器官在2分钟,5分钟、15分钟、30分钟、60分钟、120分钟后注入。放射性结果记录为每克组织注入放射性(% ID / g)为背景和衰变修正。

2.10 Biodistribution肿瘤异种移植模型

BALB / c裸小鼠随机分为不同的肿瘤模型(SW480 BxPC3,胰腺PDX),每组包括5老鼠。每个裸鼠注射0.74兆贝可(20μci) (¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1通过尾静脉。从轨道上收集的血液,小鼠解剖收集大脑,心脏,肺,肝脏,肝、脾、胃、肠、肌肉、骨骼和其他在30分钟、30分钟、60分钟、90分钟和120分钟后注入。阻塞组,研究了饱和剂量的ADH-1(20毫克/公斤的老鼠体重)静脉注射静脉注射前60分钟(¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1胰腺PDX模型和SW480异种移植模型。小鼠肿瘤异种移植模型中被牺牲1 h后[¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1注入。裸体小鼠解剖,肿瘤组织和相关组织(血液、大脑、心脏、肺、肝、脾、肾、胃、肠、肌肉和骨骼)的体重,和他们的放射性物质被γ-counter测量。放射性结果记录为% ID / g。

2.11 Micro-PET成像

(¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1裸小鼠移植瘤模型被micro-PET成像在评价PDX肿瘤,sw - 480和BxPC3肿瘤异种移植。每个肿瘤裸鼠注射3.7兆贝可(¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1通过尾静脉。与异氟烷麻醉后,带有裸体小鼠成像使用micro-PET / CT扫描仪在60分钟post-injection连续异氟烷吸入使用鼻罩连接管。Micro-PET / CT扫描三维地震采集后进行低剂量CT扫描,每床10分钟。阻止研究,饱和剂量的无标号ADH-1(20毫克/公斤的老鼠体重)是静脉注射前60分钟的静脉注射¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1。

感兴趣的三维体积(VOI)是用来评估的标准吸收值(SUV)选定的器官。西门子Inveon分析软件配置micro-PET / CT用于描述感兴趣的区域的边缘肿瘤和PET图像上的每个正常组织。随后,每个地区的利益衡量的SUV,和肿瘤/非比值(T / NT)肿瘤与正常组织之间测量。

2.12 Immunohistostaining

肿瘤组织固定在10%甲醇为4小时。样本然后在分级脱水乙醇,嵌入在石蜡,切成5μm部分。部分与N-cadherin孵化(鼠单克隆抗体1∶Abcam)然后山羊anti-mouse二级抗体(Abcam稀释1:200)。第二抗体是由结合辣根过氧化物酶(合)和山羊anti-mouse免疫球蛋白。然后,部分沾diaminobenzidine (DAB)染色方案。民建联的催化下生成棕色沉淀合,从而放大信号和发展中颜色。经过一系列的常规处理,免疫组织化学终于获得图像。

2.13统计分析

使用SPSS 26.0软件进行分析,定量实验中的数据被表示为平均数±标准差。t以及分析用于比较两组之间的差异;方差分析是用于比较多个组织。一个p -被认为具有统计显著性值小于0.05。

3的结果

3.1合成肽

一个标准FMOC固相合成被用来合成NOTA-ADH-1和Cy3-ADH-1 (方案1)。合成肽为特征的高分辨率质谱(,8经)(补充数据S1,S2),高效液相色谱法测定其纯度,揭示化学纯度大于95%。

3.2在体外手机绑定测试

的在体外结果表明,SW480细胞吸收的程度Cy3-ADH-1浓度,表现出越来越荧光强度随着Cy3-ADH-1浓度。相比之下,没有发现明显的荧光信号在空白控制管(图1)。竞争性抑制试验表明,无标号ADH-1显著影响Cy3-ADH-1 SW480细胞的吸收,与200 nm抑制组显示更高的吸收比50 nm抑制组(图2)。没有明显的吸收(或荧光信号)的Cy3-ADH-1 BXPC3观察细胞的浓度范围5μM 200μM (图3)。

3.3放射化学合成

(¹⁸使用[F] AlF-NOTA-ADH-1成功做好准备¹⁸F]阿尔夫方法(方案2)。薄层色谱法进行反应的解决方案。所示图4氟离子峰是在原点,和产品的射频¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1是0.5。的non-decay纠正放射化学的产生¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1 28.07±2.42% (n = 20),放射性示踪剂的放射性是310 - 500 mci和高效液相色谱分析表明,药物的保留时间为9.4分钟。收音机克分子活性的药物为153.55±28.25 GBq /更易,和放射化学纯度为98.1±0.6% (图5)。辐射合成反应的总时间约为30分钟。(¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1产品是无色、透明,酸度计为6.5。细菌内毒素水平的药物是无菌的,每毫升不到10欧盟。测量产品的分配系数为-2.45±0.09,表明该探针是亲水的。药物稳定在37°C在PBS和牛血清,和放射化学纯度约为95.0%和95.5,分别经过8 h。结果表明,[¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1稳定体外。

3.4生物分布的¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1在正常小鼠

研究结果表明,[¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1快速血液间隙。注射后的¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1放射性浓度(¹⁸血为18.84±1.95% F] AlF-NOTA-ADH-1 id / g(2分钟,8.77±1.37% id / g在5分钟,3.79±1.19% id / g(15分钟,在30分钟和2.28±0.81% id / g,显著降低到1.04±0.36% id / g在120分钟后注入。(¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1广泛分布在肾脏和肠道,表明(¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1主要从泌尿系统排出,肝胆的系统。此外,较低的吸收在肺部,和肌肉组织和几乎没有吸收的脑组织,表明探测器不有效地穿过血脑屏障(表1)。

3.5生物分布的¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1带有裸体小鼠

正常组织的生物分布在肿瘤裸体小鼠与正常小鼠相似,具有高放射性摄取肝脏和肾脏(表2- - - - - -4)。探讨肿瘤吸收的¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1在胰腺PDX异种移植模型中,肿瘤,血液和组织/器官切除测量放射性物质。最高的肿瘤吸收观察注射后60分钟,表明这可能是一个适当的时间肿瘤成像。阻断组肿瘤的放射性摄取3.75±0.07% id在60分钟p / g。我,明显低于非阻塞抑制组(t= 5.304,p= 0.006)。在SW480肿瘤裸鼠肿瘤/肌肉(T / M)比例最高60分钟(1.91±0.69)。在阻断抑制实验中,肿瘤的放射性摄取1.07±0.57% id在60分钟p / g。我,低于非阻塞组(p= 0.004)。在BxPC3肿瘤模型中,没有明显的吸收的¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1观察肿瘤组织。

3.6已micro-PET成像研究

微的宠物研究[¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1裸小鼠移植瘤模型进行胰腺PDX,人类结肠癌SW480癌和胰腺癌BxPC3肿瘤异种移植在60分钟p。显著提高肿瘤组织的放射性摄取PDX肿瘤模型所示,肿瘤/肌肉比率为8.069±2.832。未标示ADH-1抑制剂可以显著降低T / NT比率,T /骨为2.263±0.465,和5.062±0.805 (T /肺图6)。T / NT比率显示无堵塞组和阻塞组之间的显著差异,包括T /肌肉(p= 0.003),T /骨(p= 0.023),T /肾(p= 0.0001),T /肝(p= 0.002),T /肺(p= 0.001)。免疫组织化学染色显示强阳性N-calcium粘附在肿瘤组织中表达,支持[18 f] AlF-NOTA-ADH-1的高特异性结合肿瘤表达N-calcium粘连在活的有机体内。

所示图7,micro-PET成像的SW480肿瘤的裸鼠模型注射后60分钟(¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1显示肿瘤与肿瘤的高放射性摄取/肌肉比例为1.443±0.121,1.903±0.273 T /骨,和T /肺3.359±2.998,未标示ADH-1抑制剂可以显著降低T / NT比率。在观察T / NT比率显著差异之间的无堵塞组和阻塞组,包括T /肌肉(p= 0.019),T /骨(p= 0.002),T /肝(p= 0.001),T /肺(p= 0.008)。免疫组织化学染色显示积极N-calcium粘附在肿瘤组织中表达。然而,没有观察到显著增加放射性摄取BxPC3-bearing肿瘤模型小鼠的肿瘤组织,肿瘤/肌肉比率为1.018±0.498,0.055±0.022 T /骨,T /肺0.291±0.195。N-cadherin的免疫组织化学染色显示低表达在肿瘤组织(图8)。

4讨论

最近的研究发现,钙粘蛋白的表达在某些肿瘤的损失往往伴随着N-cadherin老年病的表达式(32,33),它也被称为“钙粘着蛋白开关”(33,34)。N-cadherin分子,也被称为神经钙粘蛋白,分子量为140 kd,主要表达间充质细胞,内皮细胞,肌肉细胞和造血干细胞(11)。然而,最近的研究调查N-cadherin老年病的各种与增强肿瘤侵袭性肿瘤及其相关。在乳腺癌中,N-cadherin与纤维母细胞生长因子受体(FGFR) (35),激活信号通路,诱导的表达矩阵metalloproteinase-9 (MMP-9) (36),从而促进肿瘤的侵袭转移(20.,35)。恶性黑色素瘤,膀胱癌和前列腺癌,N-cadherin促进肿瘤细胞入侵通过激活信号通路,抑制肿瘤细胞凋亡,这有利于肿瘤细胞生存(37,38)。这些研究表明N-cadherin不仅可以直接诱导细胞迁移,也促进肿瘤细胞的生存,促进肿瘤细胞入侵。此外,研究也表明,N-cadherin-mediated之间粘附肿瘤细胞和间质细胞肿瘤传播的过程中扮演着重要的角色和转移(34)。例如,在黑素瘤的侵袭性增长(39),N-cadherin介导肿瘤细胞之间的交互和其他细胞真皮。它促进成纤维细胞形成和分泌细胞因子和细胞外基质支架蛋白酶通过旁分泌机制(40)。N-cadherin也在血管生成和成熟中扮演着重要的角色。屏蔽的功能N-cadherin抑制性抗体在胚胎发育缺陷的周皮细胞招聘和干扰血管生成(41)。

因此,N-cadherin可以促进肿瘤侵袭转移通过诱导细胞迁移,抑制细胞凋亡,调节肿瘤细胞和间质细胞之间的粘附,并促进血管生成(22)。因此,N-cadherin可以作为肿瘤诊断和治疗的新目标。ADH-1是主要的N-cadherin拮抗剂,显著改变N-cadherin粘附、增殖,迁移,以及提高细胞凋亡在许多肿瘤(11,18,42)。1期临床研究涉及16个人类转移性黑色素瘤患者,包括6名患者没有回应美法仑,仅显示ADH-1 +美法仑治疗是有效的。在三个月的治疗,8个病人显示一个完整的反应,两人部分回应,两人稳定的疾病,和四个渐进疾病(23)。另一期临床研究表明,稳定两卵巢癌患者长时间(17)。然而,靶向肿瘤治疗,实际上ADH-1好处少数患者由于肿瘤的生物学异质性。PET成像可用于识别肿瘤类型,屏幕可能会受益于靶向治疗的患者人群,评估治疗的反应,并预测治疗效果。在这项研究中,(¹⁸F] AlF-labeled ADH-1探针是radiosynthesized N-cadherin特定目标成像。

Cy3-labeled ADH-1和标记前体NOTA-ADH-1被FMOC合成方法,以及免疫荧光(如果)染色技术被用来研究细胞吸收的化合物以及抑制试验。此外,Cy3-ADH-1可以绑定5μM SW480细胞,和橙色荧光检测细胞膜和细胞质中。肿瘤细胞吸收的数量和强度随着浓度的增加而增加50μM Cy3-ADH-1和达到最高峰,然后随着浓度的增加仍然保持不变。相比之下,空白控制管没有橙色荧光。同时化验表明,抑制SW480细胞明显被标记ADH-1过剩。200纳米的抑制作用优于50 nM无标号ADH-1过剩。这是按照receptor-ligand竞争法律约束力。然而,胰腺癌BxPC3细胞没有表现出显著增加荧光吸收在肿瘤组织在不同浓度间隔从200年5μMμM,大概由于低BxPC3 N-cadherin表达胰腺癌细胞,证实了在活的有机体内N-cadherin裸小鼠的免疫组织化学染色。

¹⁸F是由回旋加速器加速高收益率(mci)超过1000,和一个半衰期是110分钟。相比之下,^68年遗传算法,¹⁸F能满足检测需要大量的患者;它是理想的正电子核素标记多肽(43)。在这项研究中,(¹⁸F]阿尔夫标记方法采用(44,45)。的结合反应¹⁸歧视和NOTA-ADH-1前兆AlCl的摩尔比率₃是至关重要的。标签产量最高的间变性大细胞淋巴瘤引起的(55%)₃26 nmol和5.5倍前体的浓度。然而,过度的间变性大细胞淋巴瘤引起₃结果在降低标签收益率Al与背板可以形成一个稳定的复杂,竞争¹⁸歧视螯合,导致标签率较低。与C-18列相比,与HLB列高收益率,¹⁸F离子具有高极性和极性缓冲溶液可以被删除。获得产品的放射化学纯度非常高,不需要进一步的高效液相色谱纯化,以满足临床需求。此外,在血清标记产品稳定,在活的有机体内biodistribution实验证实,骨吸收不高,表明没有明显在活的有机体内脱氟作用。

为了研究调查的目标效果,老鼠轴承肿瘤不同表情的N-cadherin被选作研究。biodistribution显示探测器主要积累在肾脏和肝脏,随后随时间衰减,表明主要通过肾排泄尿和肝胆的系统。biodistribution结果(¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1 PDX轴承胰腺癌肿瘤的老鼠显示调查积累了更加突出的肿瘤,肿瘤/肿瘤组织比最高的60分钟,高表达的N-cadherin有关。的biodistribution SW480带有裸体小鼠显示轻微的探针,与肿瘤/肌肉比峰值在60分钟,随着时间的推移逐渐减少。温和的吸收也与N-cadherin表达式的适度染色病理组织的免疫组织化学染色。在胰腺癌BxPC3带有裸体小鼠肿瘤/肌肉比例是最低的,这符合N-cad低表达的肿瘤类型。不同肿瘤的biodistribution说明相关的探测是专门N-cadherin肿瘤组织中表达。

此外,为了研究是否存在竞争性抑制肿瘤组织,20毫克/公斤的无标号ADH-1解决方案是coinjected PDX块组的肿瘤,和肿瘤的放射性摄取值明显低于非阻塞的抑制,这是3.75±0.07% ID / g和10.76±2.16% ID / g注射后60分钟,分别为(p= 0.006)。SW480肿瘤的放射性摄取值也低于非阻塞抑制组。阻塞PDX和SW480肿瘤模型实验表明,(¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1具有良好的靶向特异性。

微型PET / CT成像的胰腺癌PDX模型显示良好的肿瘤吸收60分钟注射后,肿瘤/肌肉比达到8.70±2.68。此外,PDX tumor-blocking实验表明,肿瘤可以被一个非放射性ADH-1小肽和衰减成像,在PDX同意biodistribution实验模型。SW480演示了温和的肿瘤的裸鼠模型,和SW480肿瘤也可以被一个非放射性ADH-1小肽和减毒的成像。PET成像BxPC3胰腺癌模型的显示肿瘤吸收最少,和免疫组织化学实验显示强阳性N-calcium粘附PDX肿瘤中表达,积极表达SW480肿瘤,和低表达BxPC3肿瘤。micro-PET结果表明,探测器(¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1可以辨别N-cadherin的表达在肿瘤。

5的结论

在目前的研究中,N-cadherin-targeted荧光和NOTA-modified衍生品Cy3-ADH-1 NOTA-ADH-1被成功合成。N-cadherin-targeted PET成像探测器(¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1成功radiosynthesized。荧光成像技术显示,Cy3-ADH-1可能被SW480细胞吸收,及其吸收被过度ADH-1抑制,而胰腺癌BxPC3细胞没有表现出显著的荧光探针Cy3-ADH-1的吸收。在活的有机体内biodistribution研究和micro-PET / CT成像的研究¹⁸F-AlF-NOTA-ADH-1证实了PET成像探针可以用不同表情的N-cadherin区分肿瘤。阻断实验表明,肿瘤可以被一个非放射性ADH-1肽PDX SW480肿瘤,这表明(¹⁸F] AlF-NOTA-ADH-1 N-cadherin和探针的特异性有潜在的临床转化。

数据可用性声明

最初的贡献提出了研究中都包含在这篇文章/补充材料。进一步调查可以直接到相应的作者。

道德声明

涉及人类受试者的研究回顾和第一附属医院伦理委员会的批准,浙江大学医学院。患者/参与者提供了他们的书面知情同意参与这项研究。综述了动物研究和动物实验伦理委员会批准的第一附属医院、浙江大学医学院。

作者的贡献

M-JD HL和设计研究。Z-FL和Y-QH radiosynthesized Micro-PET执行的探测器和成像。G-HW体外细胞研究。码、ZW执行数据收集。AA、S-YZ G-LW分析结果。Q-NY和赫兹起草了手稿。所有作者的文章和批准提交的版本。

资金

这个项目是由中国国家自然科学基金(批准号81771884),浙江省自然科学基金(LTGY23H180014)和深圳市自然科学基金(JCYJ20220530160213030)。资助机构只提供金融支持,这项研究的设计,分析和解释数据和本文写作本文的作者独立完成的。

的利益冲突

作者声明,这项研究是在没有进行任何商业或财务关系可能被视为一个潜在的利益冲突。

出版商的注意

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补充材料

本文的补充材料在网上可以找到:https://www.雷竞技rebatfrontiersin.org/articles/10.3389/fonc.2023.1126721/full补充材料

引用