C-low阈值机械感受器激活就足以引发小鼠脊髓人的情感痛苦与呼吸速率增加
唐纳德j .高尚的
Rochinelle Dongmo
香格里拉帕文
Karmarcha k·马丁和
桑德拉·m·Garraway- 埃默里大学医学院细胞生物学系,亚特兰大,乔治亚州,美国
神经性疼痛的机制在脊髓损伤(SCI)后还没有完全理解。除了发生在受伤的脊髓的可塑性,外围的过程,如多动症主要痛觉受器,SCI后痛苦的表达至关重要。在成年大鼠,树干的刺激C-low阈值的调谐范围内的机械(C-LTMRs)导致疼痛过敏和提升SCI后呼吸率(RRs)。这表明C-LTMRs通常编码愉快,亲和,经历塑性传输损伤后疼痛感。因为酪氨酸羟化酶(TH) C-LTMRs表达式是一个特殊的标记,在外围,这里我们使用TH-Cre成年老鼠研究更具体的参与C-LTMRs胸挫伤SCI后级时疼痛。使用修改后的光暗室条件性位置厌恶(CPA)范例,我们评估室偏好和钱伯斯在基线之间的转换,并在响应机械和optogenetic C-LTMRs的刺激。并行,在基线和选择术后时间点,老鼠接受了非接触式RR录音和冯·弗雷评估机械过敏症。结果表明,SCI老鼠避免商会与C-LTMR刺激有关,与光刺激的效果更加明显。他们也显示高架RRs在休息和会计师培训班。重要的是,这些改变将被限制在慢性对象时间点,当hindpaw机械过敏症也明显。 Together, these results suggest that C-LTMR afferent plasticity, coexisting with potentially facilitatory changes in breathing, drives at-level affective pain following SCI in adult mice.
1。介绍
神经性疼痛,常见的疼痛引起的直接破坏神经系统,是一个临床相关的脊髓损伤(SCI)的结果可能有经验的伤害(即。“级”的痛苦;Finnerup et al ., 2001;西达et al ., 2003;Felix et al ., 2007)。尽管SCI患者的疼痛患病率约70% (西达、卫矛2001),药物治疗往往不足,仅略减少疼痛强度(Baastrup Finnerup, 2008)。尽管之前的研究主要集中在在受伤的脊髓可塑性,有越来越多的认识到外围可塑性SCI后导致疼痛。例如,增加自发活动主要痛觉受器产生疼痛(Bedi et al ., 2010),外围输入加剧疼痛的痛苦行为(Garraway et al ., 2014;马丁et al ., 2019SCI后)。虽然这些先前的研究确定活动痛觉受器对疼痛敏感,至关重要的角色特定传入的亚种,包括non-nociceptors SCI-induced神经性疼痛仍然知之甚少。
C-low阈值的机械(C-LTMRs)可能代表一组初级传入纤维导致疼痛SCI后,他们一直与其他损伤模型(密封et al ., 2009;Mahns Nagi, 2013)。C-LTMRs小直径,无髓鞘的传入纤维分布主干毛皮肤。他们终止在背角板二世(李et al ., 2011),突出起宽动态范围(世界发展报告》)板我spinoparabrachial投射神经元(安德鲁,2010;克雷格,2010)。C-LTMRs是由酪氨酸羟化酶(TH)表达(李et al ., 2011;卢et al ., 2013),通常编码愉悦的情感成分,亲和联系(Iggo 1960;Bessou et al ., 1971;Olausson et al ., 2002;Loken et al ., 2009;李et al ., 2011;Liljencrantz Olausson, 2014;齐默尔曼et al ., 2014)。在SCI患者持续疼痛,温柔的抚摸刺激适用于毛皮肤病变级别,刺激激活C-tactile纤维(CTs,相当于人类C-LTMRs;Loken et al ., 2009)产生感觉过敏和异常性疼痛(Finnerup et al ., 2003)。因此,C-LTMRs慢性疼痛研究的一个重要目标,但相关的一些临床前研究SCI-induced痛苦皮肤的干线信号,包括传入塑性损伤的节段水平(例如,Oatway et al ., 2004;Yezierski et al ., 2004;皇冠et al ., 2006;Bedi et al ., 2010这些传入驻留。C-LTMRs可能激活交感神经通路的一部分allodynic响应。相反,交感神经刺激直接激发C-LTMRs,并增加他们对应用机械刺激的敏感性(罗伯茨和莱维特,1982年;罗伯茨和Elardo, 1985年;Barasi林恩,1986)。创伤性疼痛与增加交感神经活动(Kinnman莱文,1995 a,b;Janig et al ., 1996;ram et al ., 1999;Zhang et al ., 2004),和疼痛的刺激可以激活交感神经系统,增加心率和呼吸率(RR;狼和哈代,1941年;Culman et al ., 1997;凉廊et al ., 2011;Santuzzi et al ., 2013)。放缓RR (格兰特和Rainville, 2009年;高贵的et al ., 2017)或阻断交感神经通路(ibsen Pinheiro et al ., 2015)可以减轻疼痛的敏感性。
我们实验室最近发现,机械刺激C-LTMRs调谐范围内,交付给成年老鼠SCI后,增加RRs的时间点一致的表达疼痛(高贵的et al ., 2019)。SCI大鼠基底RRs严重受伤后也会更高。这些结果支持C-LTMRs参与层次SCI疼痛和表明急性RRs的变化可以作为一种生理指数的疼痛。可想而知,C-LTMRs接受中央或外围SCI后可塑性。识别特定的角色C-LTMRs在SCI-induced神经性疼痛,我们成人转基因小鼠进行了研究使用小说条件性位置厌恶(CPA)模式。我们使用optogenetic技术使选择性刺激TH-expressing躯干皮肤皮肤传入纤维,并研究其影响affective-motivational(视为“情感”)行为和RRs SCI后疼痛。
2。材料和方法
2.1动物保健和一代的转基因小鼠
所有实验都是在成年男性和女性的转基因小鼠表达Cre重组酶的监管控制鼠标TH基因,即。“TH-Cre”老鼠。老鼠大约10周大,体重20 g - 26(雌性)和g(男性)在实验过程的开始。他们被安置在标准笼子在植物园12:12-h光暗周期(7点灯/ 7点灯光),与所有行为测试和呼吸录音灯期间执行。动物饲料标准的啮齿动物随意。实验程序批准的动物保健和使用委员会埃默里大学和符合国家标准的护理和使用实验动物和美国生理学会的“动物保健和使用指导原则”。
小鼠在我们的动物殖民地起源于两种商用菌株;突变小鼠资源和研究中心(MMRRC) # 017262或杰克逊实验室(JAX) # 025614小鼠;后者应变表达tamoxifen-inducible Cre重组酶(Cre / ERT2)。optogenetic实验,TH-Cre和tamoxifen-inducible“TH-Cre-ER”老鼠交叉与应变表达Cre-dependent脑细胞(杆)2-eyfp(黄色荧光蛋白)融合蛋白后接触Cre重组酶[Ai32 RCL-ChR2 (H134R) / eYFP;JAX # 024109),生成TH: ChR2-eYFP转基因小鼠。这允许直接光学瞄准C-LTMRs根据已知分子概要文件(李et al ., 2011)。tamoxifen-inducible Cre老鼠穿过应变TH: ChR2-eYFP服用三苯氧胺溶解在花生油((TAM)、5毫克/天,2天(1天)或2毫克/天/连续三天),由皮下(SC)政府在脖子上的颈背)诱导转基因表达。TAM在管理或断奶后不久,大约在3周的年龄,在光异氟烷麻醉。这给药方案选择基于初步电生理和免疫组织化学实验(例如,图1一个),提供确认Cre-driven YFP表达式。
图1。验证TH-transgenic老鼠和SCI模型慢性神经性疼痛。(一)离开和顶部中间:co-expression YFP和活跃在DRG侧(R-DRG)而不是侧(L-DRG)的光刺激(注意活跃在红色和YFP绿色)。白色箭头表示co-expression在单个细胞。底部的中间免疫组织化学:代表图像的胸(T) 10级脊髓节在一个天真的TH:: tdTomato成年小鼠,展示红色荧光蛋白表明TH表达肤浅的脊髓背角的薄片。观察到的投影模式支持招聘TH-positive C-LTMRs脊髓(李et al ., 2011)。正确的:电生理记录验证成功传入激活TH:: ChR-eYFP小鼠皮肤神经准备。从所有神经激活了后续列车optogenetic刺激(2.5 V, 5赫兹机枪兵。,十5 ms脉冲)。(B)图显示变化的机械反应·冯·弗雷刺激在SCI和虚假的控制老鼠(N= 10骗局,N= 10 SCI)。SCI的老鼠显示机械过敏症具有抑制受损,延伸在3 - 4周,显著降低hindpaw撤军阈值相比,自己的基线值和虚假的鼠标阈值在同一慢性时间点。平均SCI小鼠戒断阈值减少61%相比,虚假的控制。*p< 0.05和虚假的或提单,如表示。(C)退出阈值差异慢性和基线时间点与平均值绘制单个小鼠叠加(虚假和SCI),说明组差异的基础。提单,基线。
2.2手术和恢复
老鼠深深的与异氟烷麻醉(5%,天然气;降至2% - -3%一旦实现稳定的麻醉)。在无菌条件下,一个皮肤切口和背椎板切除术暴露底层脊髓胸低10级(T10)。中线挫伤伤害,老鼠收到70 kdyne零停留时间,影响到脊髓背表面与无限的地平线撞击器(ih - 0400撞击器,精密系统和仪表,费尔法克斯站,弗吉尼亚州,美国)正如我们之前描述(帕文et al ., 2021;马丁et al ., 2022)。被小心地确保背根没有椎板切除术或损坏的影响,和目标,两国激烈的背侧脊髓被解剖显微镜下检查核实。上覆的肌肉和皮肤缝合,伤口面积处理三重抗生素软膏(bacitracin-neomycin-polymyxin B)局部。虚假的控制老鼠做过同样的手术,但是没有接受科学。剩下老鼠(SCI和虚假的)恢复加热垫。动物被赋予meloxicam(5毫克/公斤,SC)后立即手术。他们也管理乳酸林格液的解决方案(0.5毫升,腹腔内(IP)]后立即手术,和一个完全相同的注入0.9%的无菌生理盐水每天第一个手术后48小时,保持水分。后续管理盐水只在需要的时候了。老鼠接受了抗生素上边(2.5毫克/公斤,SC)后立即手术,每天每天早上7天post操作(数减少尿道或膀胱感染的风险SCI的动物。实验者手动表达小鼠膀胱期间每天两次实验动物或直到空膀胱连续三天。 Mice were weighed daily for 1 week after surgery and were subsequently weighed weekly and on days when behavioral tests were undertaken. Throughout the experiments, they were carefully monitored for signs of infection or distress. Mice were assessed for impairment of locomotor function at 1 dpo using the Basso Mouse Scale (BMS;低音部et al ., 2006),以确保损伤的有效性。SCI老鼠只包括在这项研究如果他们记录1 dpo BMS 0或1的分数。三个老鼠(2 SCI和1骗局)结束前死亡行为数据收集或被SCI小鼠呈现与BMS分数大于1 1 dpo因此被排除在随后的分析(参阅“3。结果”一节)。
2.3行为分析
2.3.1·冯·弗雷测试
在基线(手术前)和21或28 dpo(见下文),一个子集的老鼠被转移到丙烯酸钱伯斯在行为测试室·冯·弗雷机械敏感性测试。这个试验没有进行手术后1天以来SCI小鼠BMS得分0或1,表明很少hindpaw位置。所有的老鼠都适应行为套件和测试设备至少3天前手术。在测试的日子里,30分钟后适应时期,个体动物是化验的机械灵敏度(爪戒断反应)根据建立上下方法(Chaplan et al ., 1994)。校准·冯·弗雷毛(nc12775 - 99,北海岸医疗,Inc .)、摩根山,CA,美国)从灯丝评估者尺寸3.22(目标力0.16 g)管理从下面一个金属网平台测试每个动物的敏感度hindpaw的机械刺激。左、右爪撤军阈值是平均来确定整体机械敏感性。减少·冯·弗雷撤军从基线水平阈值与机械敏感性增加。
2.3.2条件性位置厌恶(CPA)
提供一个验证的评估在层次、C-LTMR-mediated疼痛SCI后,我们实验室开发了一种修改注册会计师范式模型小鼠的情感痛苦使用协议适应从先前的研究(无角的et al ., 2008;杨et al ., 2014;Bagdas et al ., 2016;Refsgaard et al ., 2016;吴et al ., 2017包括我们自己的(马丁et al ., 2022)。定制的CPA装置包括黑色和白色室隔开一个小分区。每个注册会计师框包含一个小窗口允许入口刷或光纤电缆optogenetic刺激。两个独立的实验。第一个调查更多的行为学的相关刷刺激,结果确定峰值的时间窗口行为灵敏度受伤后为针对C-LTMRs optogenetic技术在第二个实验中。在两个实验中,刺激了整个动物的鼻子的距离~ 3厘米,和刺激提供30 - 60年代的interstimulus间隔。录像中收集测试时间和时间的百分比在non-stimulated室之前和之后的刺激被送往显示相对厌恶的地方。注意,对于刷CPA,所有老鼠都在黑暗中刺激室,而提高实验设计最初首选室(偶尔光室)总是用作光学刺激商会注册会计师;因此使用在光(CPA)刷vs . % %非光学(CPA)室报道的结果变量。刷CPA,刺激进行每周的时间点建立一个初步的时间表C-LTMR-related痛苦的厌恶。 Subsequently, results from these studies were used to guide the selection of timepoints for a 5-day CPA paradigm tailored to peak stimulus aversiveness for optical stimulation in the second experiment (separate mice).
2.3.2.1刷刺激会计师队列
这个实验是在14 TH-Cre老鼠(做N= 7,SCI和虚假的)。使用修改后的光暗室CPA范式,我们评估的偏好在一天时间点从1到5周后手术。手术后1周开始,老鼠给树干的刺激用组织学的画笔(驼绒# 4,泰德斗篷,Inc .)、整理、钙、美国)研究疼痛的影响。每30分钟测试包括三个不同的时期(比较下面光学CPA的长期性质,在以允许更大的条件反应的时间发展,这三个时期是间隔超过5天没有超过发生在给定的一天)。pre-stimulation测试期间,老鼠能有自由进入两院(黑暗与光明)10分钟,然后老鼠收到5分钟机械刺激的树干用刷子(次/分钟),而局限于黑暗的室。为此,我们选择手动刺激速度(~ 1厘米/秒),对应的调优性能C-LTMRs (Loken et al ., 2009;高贵的et al ., 2019)。在平衡5分钟“控制”时代的光室,老鼠没有得到机械刺激。最后,在10分钟post-stimulation测试,老鼠又允许获得两院10分钟没有刺激。老鼠在这个实验中接受了冯·弗雷在基线和21 dpo测试。
2.3.2.2 Optogenetic刺激会计师队列
这个实验是在16个老鼠如下:12 TH-Cre-ER老鼠(N= 7 SCI,N= 5骗局)和四个TH-Cre老鼠(N= 2 SCI,N= 2假),空空的十字架。结果提示组合基因型之间没有统计学差异,所以他们统称为TH: ChR2-eYFP老鼠。封装的峰灵敏度观察刷,集中在28 dpo(参见“3。结果”一节),光学测试从26到30 dpo会计师。举个测试(26数,老鼠被放置在光室和免费访问完整的仪器30分钟的测试时间确定基线时间花在每个室。然后他们收到每日30分钟训练会话的三天(27 - 29数。在他们喜欢的房间,动物收到光刺激(一次/分钟10分钟,5分钟后习惯化时期)提供激光激活C-LTMRs。光缆是位置靠近腹部的老鼠和蓝色光照明席卷皮肤而动物部分克制。对于局部约束,老鼠搬到一个丙烯酸圆柱管(啮齿动物抑制剂;IITC生命科学,森林山,CA)提供了足够的空间向前和向后而不是横着。 This setup balanced the confinement necessary for high-fidelity electric field sensor recordings with stress reduction measures. Mice were acclimated to the cylinder for at least 3 days prior to surgery, and RR was confirmed to stabilize. Fur was shaved at the segmental level of injury for better illumination of cutaneous and subcutaneous nerve fibers. In the control, non-preferred chambers, mice received fake “stimulation” delivered with the laser box powered off but under similar partial restraint (again at once/min for 10 min after a 5-min habituation). The frequency, duration, and intensity of the light stimulation were manually controlled. The fiber optic cable delivered up to 5,204 mW/cm2沿着树干的蓝光皮肤。调节阶段完成后一天(30数,每个鼠标再次被允许自由进入探索两院为30分钟后置条件测试,没有刺激。老鼠在这个实验中接受hindpaw·冯·弗雷在基线和28 dpo测试,来验证hindpaw敏感性明显时注册会计师行为评估。
2.4呼吸监测和分析
休息和optically-evoked呼吸测量获得的一个子集的老鼠在上面的行为分析中使用。在基线,和1和21 dpo 7点(一个子集数,顺序老鼠搬到了一个圆柱管(啮齿动物抑制剂,IITC生命科学、森林山、钙、美国)为1小时呼吸录音建立基底,自发的RR(休息)。小鼠接受光学CPA,培训期间的长期调节会议(第2 - 4天5天范式)相比,刷会计师也允许诱发RR的连续监测。在这两种情况下,记录了使用远程传感器用于此目的。
2.4.1 RR休息
1小时录音的数据被用来确定休息RR值基线和几个对象测试点。在实验之前,非接触式电场传感器(Plessey半导体史诗,普利茅斯,英国)在外部的啮齿动物围栏,用电线连接到一个电源盒。这个盒子还适应连接刺刀Neill-Concelman输出为后续信号数字化和数据收集。模拟传感器信号是低通滤波(带宽直流12赫兹)和数字化在单位增益和1 kHz的采样率。数字化数据连续输出到Windows计算机运行虚拟仪器(美国国家仪器、奥斯汀、TX),记录数据处理由一个定制的接口(程序设计的威廉·n . Goolsby)。所有的手动和自动分析原始传感器输出实现了使用Clampfit分析软件(美国加利福尼亚州圣何塞分子器件、)。在Clampfit,原始信号进行了分析和过滤,基于阈值的检测个人的呼吸了。Clampfit计算瞬时RRs整个记录,然后平均在一段休息休息RR确定最后一个值。每个记录的第一个20分钟,在动物适应环境,unscored。录像证实最终值只捕获RR在动物休息状态。 Although it was attempted, recording RR during von Frey stimulation proved unreliable due to excessive motion artifacts.
2.4.2 Optically-evoked RR
呼吸录音收集方法在CPA过程(optogenetic和控制刺激)使用上面描述的远程传感器。类似于休息RR, optically-evoked RR Clampfit计算瞬时RR-in散点图的这种情况下,相伴与调节会议注册会计师室(27 - 29数。大约10时代的高保真呼吸录音从每个interstimulus间隔(即被孤立。之间,连续刺激)。几个复制测量RR然后平均获得个人数据点对所有六scorable时间(三个调节会话,每个会话由激光刺激和控制条件)。
2.5荧光组织化学和电生理学的验证
:(i)确认光刺激激活TH-positive细胞背根神经节(DRG),和(2)验证表达式模式的预测在脊髓,荧光组织化学。:(i)验证光学C-LTMRs的激活与小鼠脑细胞,TH-Cre-ER老鼠交叉(JAX # 024109)和后代(TH:: ChR2-eYFP老鼠)服用TAM如上所述。两个TAM-treated TH: ChR2-eYFP SCI老鼠光刺激10分钟以类似方式上面注册会计师调节会话,但动物的一侧的中线,以确定刺激治疗的影响神经元激活的标志。灌注小鼠immunolabeling刺激后30分钟,与细胞co-labeling磷酸化ERK(活跃)蛋白质和TH (C-LTMRs,由YFP)所示DRG (图1一个(左)和顶部中间)。咖啡馆是一个关键的标志神经活动和疼痛过敏(徐et al ., 2008;高和霁,2009;Garraway et al ., 2011)。:(2)揭示了TH的表达式模式预测的脊髓,TH-Cre-ER老鼠穿过tdTomato老鼠JAX #(007908)和后代(TH:: tdTomato老鼠)服用TAM如上所述。两个天真的TH:: tdTomato小鼠成像(图1一个底部的中间)。
在这两种情况下,小鼠麻醉与聚氨酯(1.2 g / kg, IP)和灌注transcardially磷酸盐(PBS)其次是4%多聚甲醛(PFA) PBS。脊髓和/或诊断相关解剖,你找找PFA 4% 2 h后转移到cryoprotection 30%的蔗糖。横截面(20μm)下胸线或DRG被低温恒温器(美国徕卡微系统,布法罗格罗夫,IL)和安装在Superfrost +幻灯片(费舍尔科学,宾夕法尼亚州匹兹堡,美国)。一夜之间,幻灯片被干,然后储存在−80°C到使用的时间。荧光免疫组织化学,脊髓和按部分洗在PBS和PBS 0.1% Triton x - 100 (PBS-T),然后孵化屏蔽解决方案[5%驴血清(# 017 - 000 - 121 -杰克逊ImmunoResearch实验室,Inc .)、西树林,PA,美国)PBS-T)在室温下1 h。:(i)验证光学C-LTMRs激活,部分被孵化在兔子anti-pERK (1:200;# 4370 -细胞信号,Inc .)、美国纽约美国普莱西德湖)和/或荧光蛋白(鸡反对环保绿色荧光蛋白;1:50 0;# ab13970-Abcam Inc .)、英国剑桥)主要抗体阻断在室温下24小时解决方案在一个潮湿的室温柔旋转板(GFP抗体检测YFP)。部分是在PBS-T洗,然后孵化Cy3-conjugated驴anti-rabbit(摘要; #711-165-152—Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc., West Grove, PA, USA) and/or Cy2-conjugated donkey anti-chicken (1:100; #703-225-155—Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc., West Grove, PA, USA) fluorescent secondary antibody in blocking solution for 1 h at room temperature. To: (ii) reveal the expression pattern of TH projections in the spinal cord, sections were instead incubated in rabbit anti-red fluorescent protein (RFP; 1:250 in 1% BSA-PBS; #600-401-379—Rockland Immunochemicals, Inc., Gilbertsville, PA, USA) primary antibody in blocking solution for 48 h at 4°C in a humid chamber on a gentle rotator plate. The sections were washed in PBS-T and then incubated in Cy3-conjugated donkey anti-rabbit (1:500 in 1% BSA-PBS; #711-165-152—Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc., West Grove, PA, USA) fluorescent secondary antibody in blocking solution for 1 h at room temperature.
后另一个在PBS系列洗,所有部分都安装在延长黄金防安装介质(表达载体,尤金,或者美国),和盖玻片。串行图像是用一个数字/共焦显微镜(日本基恩士vhx - 7000数字光学显微镜,4×20×物镜,大阪,日本)和缝合砾岩图像使用奥林巴斯Fluoview版本5(奥林巴斯美国公司,中心山谷,PA,美国)。
电生理过程已发表的详细信息(教务长,2019)。短暂,电生理记录进行验证optogenetic C-LTMR激活在成人具有抑制受损使用TH:延伸SCI老鼠~ 3个月:ChR-eYFP小鼠皮肤神经准备。记录了从胸脊髓背侧皮神经段T8通过病人。皮肤,附加背侧皮神经,被epidermal-side录音盘,在一个洞在一顶帽子和螺丝。皮肤形成密封,这道菜充满了循环浴维持在26°C。神经的远端是连接到一个紧身吸入电极,和盘子被放在一个圆孔在高架平台。光纤电缆被固定在一个计算机控制的机械臂的底部平台。纤维蓝色光脉冲被用来唤起活动TH-positive C-LTMRs。从神经激活获得后续列车optogenetic刺激(2.5 V, 5赫兹机枪兵。,10 5 ms脉冲)。
2.6统计分析和致盲
注册会计师和冯·弗雷行为评估是由同一个人。虽然不可能盲目的实验动物组将在SCI明显下肢损伤小鼠,足够的步骤进行实验偏差最小化。例如,RR录音和注册会计师视频编码之前得分。这确保了致盲的RR动物观察的数据记录以来取得了独立。同时,尽管注册会计师得分需要动物行为的观察,这些措施的简单性质(时间在每个室和口岸chambers)之间留下任何余地实验者偏差。
数据提出了均值±SEM,除非另有注明。所有行为(冯·弗雷和注册会计师测试)和RR(休息和optically-evoked RR)数据分析了独立为每个组(虚假的或挫伤SCI)使用单向重复措施(RM)方差分析与天术后受试的因素。因果测试修正进行多重比较的重要结果。在所有情况下,多个比较测试选择的选择根据GraphPad棱镜(考虑到为特定数据集是否合适)。配对t测试是偶尔按计划进行比较,显示的文本。比较组间术后使用RM双向方差分析完成了天试因素和集团(虚假的或SCI)主题之间的因素。如上所述,因果测试修正进行多重比较的重要结果。未配对t测试比较组意味着偶尔按计划执行比较,再次显示在文本。量化情感之间的关系(CPA)疼痛,hindpaw机械敏感性,和RR改变,相关性分析在不同时间点对应于观察到的变化在SCI老鼠。统计数据进行GraphPad棱镜(美国GraphPad软件,拉霍亚,CA),设置在与意义p< 0.05和双尾测试。
3所示。结果
下面的两个主要的实验之前,老鼠被分配接受虚假的手术(N= 15;八个女性和7个男性)或胸水平(T10)温和的中线挫伤SCI (N= 18;10女性和八个男性)。一个虚假的老鼠和两个SCI老鼠符合排除标准(参见“2。材料与方法”部分),并不包括在后续分析。两个TH:: ChR2-eYFP SCI和两个天真的TH:: tdTomato老鼠也用于免疫荧光。雄性和雌性老鼠的数据结合性别之间没有统计学差异的主要结果评估措施。
3.1荧光组织学
活跃的代表形象,YFP双标记在drg光学刺激所示图1一个(左和顶部中间)。与以前的报告(一致李et al ., 2011),我们的荧光组织学显示RFP标签表明TH表达的表面薄层胸脊髓背角所示图1一个(底部的中间)。观察投影模式的相似性与之前报道表明我们识别传入的细胞和解剖与C-LTMRs属性是一致的。选择招聘C-LTMRs的研究进一步支持体外电生理记录验证激活C-LTMRs光刺激的一些相同的TH:: ChR-eYFP老鼠用于行为实验,所示图1一个(右)。
3.2·冯·弗雷测试
虚假的老鼠没有任何差异的敏感性在冯·弗雷测试从基线到第21至28 dpo (t(9)= 1.0,p> 0.05,配对t以及)。相比之下,SCI老鼠得分具有抑制受损时间点明显延伸hindpaw敏感性在这些慢性开发机械过敏(t(9)= 3.4,p< 0.01,配对t以及),代表g阈值降低61.4% 50%基线值(图1 b, C)。SCI的老鼠也更敏感比虚假的同行在慢性的计算(t(18)= 3.6,p< 0.005,未配对t以及)。SCI老鼠的单独的军团打进21岁和28 dpo提出年底无法区分机械阈值测试(t(8)= 0.03,p> 0.05,未配对t以及)意味着50%克阈值为0.74和0.73,分别,所以数据池来提高统计能力。
3.3条件性位置厌恶(CPA)
明暗箱CPA范式是用来评估情感疼痛反应(上下文厌恶C-LTMR刺激通过刷或激光)。在每个室室转换和时间监控中所描绘的一样图2一个。
图2。条件性位置厌恶(CPA)情感痛苦机械和光学C-LTMR刺激后的反应。(一)示意图描述了两院(明暗)注册会计师装置,说明鼠标定位在刺激(离开了,光刺激)和自由探索光室(中间)或之间的过渡室(正确的)。改编自马丁et al。(2022)。(B)SCI老鼠管理机械刷刺激而局限于黑暗室后偏爱一个光明的“转义”室损伤(* 4周后达到顶峰p< 0.05和1数。(C)我们发现类似的偏好变化TH-expressing感觉传入纤维的选择性光刺激后,C-LTMRs [*p< 0.05SCI举(PreC)与后置条件(PostC);#p< 0.05在PostC SCI和虚假的]。为(B)和(C)、水平虚线表示50%的时间花在一个non-stimulated室。(D, E)左右的总数过渡期间注册会计师行为实验被用作运动活动的广泛评估,揭示预期的障碍在SCI损伤后小鼠。注意,注册会计师预处理和post-stimulation会话的长期在第二个实验中(光刺激)导致更大的总数比刷刺激(*左右转换p< 0.05和1 dpo;#p< 0.05SCI和虚假的)。为(B)和(D),N= 7每组小鼠;为(C)和(E),N= 7虚假的和N= 9科学。
3.3.1刷CPA - %时间光室
总体平均结合预处理和post-stimulation时期被用来推导我们的主要结论关于aversiveness C-LTMR-targeting刷刺激,因为这些值代表一种更健壮的平均(超过每周20分钟时间)动物的总倾向于逃避brush-associated上下文。值%时间光室的会计师机构(以下称为“光”%)1 dpo平均25.6±5.0%,几乎相同的组间(SCI骗局:30.3±7.5:21.0±6.6)。RM单向方差分析在SCI的老鼠显示显著增加%在光天对象(F(2.0,11.8)= 5.1,p< 0.05)。比较术后“基线”(1数和随后的时间点使用Dunnett多个比较测试结果显示显著增加在所有三个慢性偏爱光室时间点(21 dpo: 52.8±8.2%,p< 0.01;28 dpo: 55.5±6.3%,p< 0.005;和35 dpo: 50.9±9.1%,p< 0.05),但不是在急性或亚急性时间点(7或14 dpo;图2 b)。相比之下,虚假的老鼠在任何计算(没有显示偏好的变化F(1.6,9.6)= 0.42,p> 0.05,RM单向方差分析),他们从不花费了超过42.6%的时间在室(7数,值甚至略有下降,慢性时间点(从21到35 dpo平均:39.1%)。使用RM双向方差分析比较两组,有显著影响,天重新在光(%F(2.6,31.0)= 3.5,p< 0.05)。然而,没有明显的影响(F(12)= 0.66,p> 0.05)。
3.3.2 Optogenetic CPA - % non-stimulated室
最小化潜在的天花板效应,optogenetic实验提供刺激老鼠他们首选室调节会议期间(偶尔光室)。举值(pre-stimulation 26岁数在刷注册会计师所观察到的类似实验中,两组支出不到30%的时间在非室(骗局:25.9±1.8%,SCI: 25.7±5.5%)。相比之下,SCI老鼠偏爱大型和重要non-stimulated室后三天的光刺激目标C-LTMRs (51.4±9.9%;t(8)= 3.4,p< 0.01,配对t以及),而虚假的老鼠没有室偏好变化(26.9±1.4%;t(6)= 0.5,p> 0.05,配对t以及;图2 c)。SCI的老鼠平均要多花费90.9%的时间在non-stimulated室post-stimulation期间比虚假的控制。尽管大型个体内的variability-especially SCI小鼠的两组明显不同(t(14)= 2.2,p< 0.05,未配对t以及)。
3.3.3转换(刷和optogenetic CPA)
运动与BMS只是进行评估1 dpo确认受伤严重。然而,两院之间的转换(即。,side-to-side crosses) in the CPA paradigm were used as a broad quantification of locomotor function and development of conditioned aversion to targeted C-LTMR stimulation at later timepoints.刷组RM:使用双向方差分析,没有主要的影响组织(SCI和虚假的)对整体转换尽管趋势(F(12)= 2.8,p= 0.12);然而,在相同的测试有主要影响的dpo (F(1.7,20.7)= 8.5,p< 0.005)。有显著变化具有抑制受损在SCI老鼠(延伸过渡的天数F(1.5,9.2)= 9.8,p< 0.01,RM单向方差分析),转换在14 dpo增加(p< 0.05)和21-35 dpo (p< 0.005)比1 dpo使用Dunnett的多重比较测试。整体虚假的鼠标转换显示出变化的趋势和dpo (F(1.5,8.8)= 3.5,p= 0.09,RM单向方差分析)。转换的增加从1 dpo慢性时间点在SCI老鼠但不是虚假的控件支持具有抑制受损(延伸逐渐恢复运动功能但不完全康复;看到图2 d, E)。光遗传学群体:SCI老鼠表现明显更少的光明与黑暗之间的过渡室比虚假的老鼠,在pre-stimulation测试(骗局:104.7±26.3,SCI: 34.8±5.8;t(14)= 2.9,p< 0.05,未配对t以及)和post-stimulation测试(SCI骗局:92.3±17.5:33.4±7.0;t(14)= 3.4,p< 0.005,未配对t以及)。没有显著的变化的过渡从pre - post-stimulation SCI (t(8)= 0.2,p> 0.05,配对t以及)或虚假的(t(6)= 1.2,p> 0.05,配对t以及)老鼠。
3.4休息和诱发RR
中所描绘的一样图3一,RR监控在基线和术后几个时间点。光学CPA调节会话的延长持续时间也允许记录诱发RRs的慢性的计算(27 - 29数。
图3。休息和诱发RR SCI老鼠的变化。(一)示意图显示呼吸监测与远程电场传感器贴在一个丙烯酸圆柱管。传感器的位置面对一个小窗口水平管允许畅通RR录音semi-restrained老鼠。基于阈值的检测进行隔离每一次呼吸和量化RRs个人记录。(B)SCI的老鼠接受刷或者注册会计师接受光刺激海拔在RR休息21天受伤后基线值相比,尽管RRs急性时间点[1 dpo和7 dpo (子群没有显示)保持不变。N= 7骗局,N= 13 SCI(C)SCI小鼠平均RRs(271±15次/分钟)监测在光学CPA范式是提升整体相比,虚假的控制平均RRs(225±16次/分钟),这是重要的,当数据分析了调节会话(C1, C2, C3集团)、双向方差分析、主要作用;然而,个人刺激似乎没有增加RR(Šidak的多重比较测试,虚假和SCI或光电子。与控制)。N= 4骗局,N= 8科学。
3.4.1 RR休息
没有主要的影响组织(SCI和虚假的)通过RM双向方差分析比较所有的老鼠接受了RR监测基线,和1和21 dpo (F(18)= 0.16,p> 0.05)。然而,SCI老鼠显示显著提升自发(休息)具有抑制受损(延伸RR随着时间的推移F(1.8,21.8)= 8.6,p< 0.005,RM单向方差分析)。因果比较显示海拔休息RR在统计意义的阈值在21 dpo与基线相比(SCI老鼠p= 0.05)。从基线是实质性的大小增加,随着RR增加从218±9到258±11次/分钟平均(增加40次/分钟)在慢性的计算(图3 b)。相比之下,SCI老鼠没有变化在1 dpo与基线相比(RR休息p> 0.05)或虚假的老鼠相比,(t(18)= 1.1,未配对t以及)。SCI老鼠测试的子集具有抑制受损的计算延伸急性(7数没有出现显著增加休息RR (t(4)= 1.6,p> 0.05,配对t以及),尽管从216年到257年平均增加呼吸/分钟表明这有限的数据集可能是统计动力不足。
3.4.2 Optically-evoked RR
SCI的老鼠进行为期5天的注册会计师整体RR范式有高于虚假的控制调节会议1 - 3 (F(53)= 9.1,p< 0.005,RM双向方差分析)。然而,当组平均被所有调节会话、SCI和虚假的老鼠没有达到意义(t(10)= 1.9,p= 0.09,未配对t以及;图3 c)。RR也不是一直大optogenetic与控制刺激后受伤的老鼠(t(7)= 0.34,p> 0.05,配对t以及)或虚假的控制(t(3)= 1.2,p> 0.05,配对t以及),暗示离解optically-evoked RR与偏好上观测到的变化。
3.5 SCI后RR增加和情感行为之间的相关性
相关性分析来评估是否休息RR变化预测CPA对刷和光学刺激的反应。SCI后按预定时间点,我们执行战略的比较:(i)理解RR的特异性变化预测厌恶机械电刷与optically-induced C-LTMR激活,和(2)与我们之前的研究发现与在层次刺激支持急性变化RR级以下的预测机械在慢性过敏症在冯·弗雷测试时间点(高贵的et al ., 2019)。刷刺激CPA, pre-stimulation室有显著相关性的偏好和基线休息RRs在SCI老鼠,较高的RRs预测偏爱光室损伤后立即r= 0.89,p< 0.05)。相反,同样的基线RRs和室7 dpo偏好负相关,反映不厌恶刺激(黑暗)室后第一次出现机械躯干的刺激(r=−0.92,p< 0.05)。基线休息RRs也消极预测在28 dpo室偏好的变化(r=−0.88,p= 0.05)。相比之下,之间存在着负相关关系变化休息RR从基线到7 dpo和基线CPA优先(r=−0.87,p= 0.05),和积极的关系7 dpo RR变化和注册会计师偏好第一次的刺激(7 dpo;r= 0.88,p= 0.05)。同样的变化在休息RR 7 dpo积极预测在28 dpo室偏好的变化(r= 0.96,p< 0.05;图4一)。小鼠接受光刺激CPA,休息RRs 1 dpo消极预测CPA non-stimulated室post-stimulation偏好(r=−0.76,p< 0.05;图4 b)。相同的小鼠急性高RRs 1 dpo也倾向于有一个清晰的室偏好在基线,显示出倾向于避免厌恶刺激(之前(不推荐)室r=−0.67,p= 0.07)。休息RR 21岁dpo optically-evoked RR显著正相关,反应在CPA调节会话(r= 0.88,p< 0.005),从基线RRs(这两个值的变化r= 0.94,p< 0.001;图4 c)。跨挫伤SCI组基线休息RR消极预测RR SCI后的变化在两个实验中,具有抑制受损时间点评估延伸两个1 dpo (r=−0.73,p< 0.005)和21 dpo (r=−0.76,p< 0.005)。即低开始RRs与更大的RR有关损伤后变化剧烈的和长期的经验图4 d),而休息RR的变化从基线到1 dpo呈正相关变化从基线到21 dpo (r= 0.66,p< 0.05)。这些影响也观察到在刷和光学会计师组织,当单独分析。
图4。RR变化之间的相关性和情感的行为。(一)7点变化休息RR dpo (SCI)后急性呼吸道可塑性的表现积极预测室偏好的变化在28 dpo刷会计师队列。(B)小鼠接受光学CPA,休息RRs 1 dpo显著预测CPA post-stimulation室偏好,这样老鼠RRs严重受伤后倾向于较高的花费减少比例的时间在刺激后的注册会计师“逃脱”室。(C)休息RRs的变化在21 dpo布莱与optically-evoked RR反应CPA调节会话中同样的队列。(D)在SCI的老鼠在这两个军团,之间存在着负相关基线休息RRs和创伤性变化在1 dpo和21 dpo RR,这样老鼠最低的RRs立即手术前接受了最伟大的RR增加受伤后。
4所示。讨论
本研究调查的贡献主要传入可塑性神经性疼痛SCI后,关注C-LTMRs。我们发现机械刺激,光刺激TH-expressing传入,想必C-LTMRs,树干在成年小鼠皮肤引起的情感痛苦的行为科学。我们还发现,SCI老鼠显示相当高度的RR在休息和注册会计师。所有这些反应在慢性时间点,当hindpaw机械过敏症也明显。这些结果表明C-LTMR传入可塑性在神经性疼痛或接近受伤的程度。
以往的经验显示,多动在SCI后痛觉受器促进疼痛(Bedi et al ., 2010;Garraway et al ., 2014;马丁et al ., 2019)。然而,是否正常non-pain转导外围传入,C-LTMRs,同样可以驱动神经性疼痛SCI后没有显示。扩大在一个先前的研究(高贵的et al ., 2019),我们现在提供证据支持对诱发C-LTMR贡献,SCI后情感痛苦。这些结果也支持传入可塑性的命题是SCI后情感痛苦的发展至关重要。
C-LTMRs的确切机制可能参与痛觉通路SCI后尚未阐明在最近的研究中,尽管可以提出几个可能性。C-LTMR的变换反应后强度的变化可能导致的损伤C-LTMR激活和/或突触后反应C-LTMR活动;例如,少C-LTMR激活或下游反应C-LTMR活动可能引起愉快的感受而更多活动或加剧背角响应SCI后可能会引起疼痛。这是可以想象的,C-LTMRs采用nociceptor-like SCI后表型,从而显示自发发射的增加(Bedi et al ., 2010),SCI-induced疼痛过敏的一个特点。C-LTMRs的另一种可能性是,像其他类小直径的初级传入纤维,经过解剖重组在中央终端(例如,韦弗et al ., 2001;Detloff et al ., 2014)。中央发芽C-LTMRs也可能使他们项目深入背角薄层,在那里他们可以依次传递感官信息通过疼痛的具体的和世界发展报告》二阶神经元。传入发芽,包括交感神经纤维,也在外围和按神经损伤后(例如,ram和Bisby, 1997;Ruocco et al ., 2000),这被认为扮演一个角色在创伤性疼痛(Kinnman莱文,1995 a,b;Janig et al ., 1996;ram et al ., 1999;Zhang et al ., 2004)。传入与伴随增加伤害感受器接受领域的萌芽可以伴随神经生长因素痛觉过敏(Pertens et al ., 1999)。虽然C-LTMR可塑性的准确位置和类型发生SCI后仍然是未知的,我们可以假设基于上述研究C-LTMRs能够接受可塑性的细胞体(兴奋性的增加),外围终端(接受域的变化和调优/招聘属性)或中央终端(传入发芽);这种可塑性是关键在层次的表达SCI后疼痛过敏。
C-LTMRs已经涉及anti-nociceptive和疼痛的过程。啮齿动物模型显示长效镇痛C-LTMR-specific抑制途径,激活释放TAFA4, chemokine-like蛋白质只有在这些传入纤维(Delfini et al ., 2013;Kambrun et al ., 2018)。速度慢,愉快的刷(3厘米/秒)最优无髓鞘的CTs的激活也可以减少热痛(Liljencrantz et al ., 2017)。C-LTMRs按摩抚摸毛的皮肤反应在活的有机体内自由和药理遗传学激活小鼠行为促进条件性位置偏爱(Vrontou et al ., 2013)。然而,C-LTMR活动也与创伤性触诱发痛小鼠(密封et al ., 2009)和人(Liljencrantz et al ., 2013;Mahns Nagi, 2013;Nagi Mahns, 2013),愉快的刷牙可以唤起实验模型的异常性疼痛疼痛包括高渗盐水(Nagi et al ., 2011)。一个潜在的问题在我们的研究是缺乏增加偏好相关的注册会计师室C-LTMR刺激在虚假的老鼠,给激活这些传入的愉悦的报道影响小鼠和人类(Loken et al ., 2009;Vrontou et al ., 2013)。然而,由于动物通常在他们喜欢刺激室(~ 70%花-80%的时间),天花板效应很可能杜绝观察任何愉快或奖励C-LTMR刺激的影响。未来的研究使用我们的模型将刺激的骗局和SCI小鼠分组人口非首选的钱伯斯评估真正的极性C-LTMR表型。显然,还需要额外的研究来阐明确切的背后机制充分C-LTMR SCI后刺激诱发疼痛。例如,研究optogenetic和行为方法结合电生理技术将是有价值的。公司的体外皮肤神经准备可以提供信息的变化C-LTMR招聘属性和接受域地图,准备在一个孤立的DRG神经元可以用来调查C-LTMRs(自发活动的出现Bedi et al ., 2010SCI后)。
另一个关键观察指出在这个研究是休息RR的变化之间的关系和情感痛苦的行为科学学科。休息RR边缘增加21岁dpo (p= 0.05),这一发现的影响观察时间点(早些时候在成年老鼠腾et al ., 1999,2003年;高贵的et al ., 2019)。我们还发现,RR敏锐地增加在同一会计师范式,成功地诱发疼痛反应,但这种效应发生在整个测试而不是限制光刺激的时期。呼吸系统并发症常伴随人类SCI (1994年杰克逊和新郎)。因为感觉和自主系统交互,RR高可能是一个同情的毒害效应的代理overactivation SCI后的不适应的疼痛。这个概念是由以前的研究显示,疼痛的刺激激活交感神经系统,从而导致增加心率和RR (狼和哈代,1941年;Culman et al ., 1997;凉廊et al ., 2011;Santuzzi et al ., 2013)。在这些报告的基础上,我们现在表明,降低胸SCI后,touch-transducing初级传入纤维促进疼痛过敏,可能同时增加RRs。令人惊讶的是,相关分析表明,虽然休息RR变化预测厌恶在层次刷刺激SCI后,这种影响并不适用于C-LTMR-specific optogenetic刺激。因此,看来RRs之间复杂的关系和情感痛苦SCI后不是由C-LTMRs独家介导,而是可能涉及多个皮肤传入神经,和/或核心电路。最可能的可能性是,尽管C-LTMRs有助于情感痛苦SCI后,SCI疼痛与RR变化的机制在很大程度上是C-LTMR-independent或取决于多种因素。这是由一项研究,表现出相关性RRs和爪子撤军阈值(即。,C-LTMR-independent疼痛)·冯·弗雷测试(高贵的et al ., 2019)。
周围神经损伤或炎症后,交感神经刺激刺激痛觉受器(检et al ., 1987;胡锦涛和朱,1989;佐藤和Perl, 1991年;佐藤et al ., 1993),和去甲肾上腺素可以激活后痛觉受器损伤(胡锦涛等人。,2000年;Tanimoto et al ., 2011)。我们观察到厌恶的影响似乎optogenetic刺激SCI后可能产生的激活交感神经节后神经元激发痛觉受器已经敏感的SCI,由此造成的伤害感受器(而不是C-LTMR)活动促进注册会计师的行为。当我们研究设计不能排除这种间接机制,免疫组织化学在SCI直接激活C-LTMRs老鼠提供了证据通过(即光刺激。,TH-positive DRG neurons ipsilateral to the dermatomal field of optical stimulation were selectively recruited;图1一个(左)和顶部中间)。这支持的特异性刺激范式C-LTMRs,他们称为分子组成和脊髓神经支配模式(李et al ., 2011;图1一个底部的中间)。交感神经节后的轴突可能发芽在周围神经损伤后的DRG增强感觉神经元激活甚至构成同步集群射击;然而,这似乎diffusion-based而不是功能耦合通过soma膜(直接连接钟et al ., 1996;Shinder et al ., 1999;郑et al ., 2022)。未来的研究应该澄清初级传入纤维和交感传出之间的关系以及它们的相对必要性和充分性SCI后开始自主运动和行为反应。然而,我们承认有必要谨慎的解释我们的结果直到未来机械研究执行明确调查的贡献。
本研究介绍了一种新颖的方法来评估在层次SCI的痛苦。尽管在——和级以下疼痛被SCI患者报告,寻找合适的研究模型来评估在层次,non-reflexive疼痛仍是极具挑战性的课题。事实上,很少有实验室方法实现(克里斯坦森和Hulsebosch, 1997年)。除了证明RR是衡量指数级的痛苦(高贵的et al ., 2019),在这里,我们设计了一个最低限度的压力,非侵入性的工具来显示,树干的刺激,在病灶周围的麻醉,诱导一个注册会计师的回应。这种策略是特别重要的,因为它使我们能够评估C-LTMRs基于他们在多毛,但不是无毛,皮肤(卢et al ., 2013)。此外,我们首次展示,脊椎上的non-reflexive疼痛刺激反应诱发的C-LTMRs SCI后,老鼠的时候也显示hindpaw机械过敏症。这些发现证实的表达——和级以下疼痛SCI后(Finnerup et al ., 2001;西达et al ., 2003;Felix et al ., 2007)。机械化,背角损伤后损伤可能导致赤字C-LTMR感觉脊椎上的处理和削弱输入大脑中心,包括那些参与影响疼痛的调制作用。C-LTMR失调后背角受伤也会增加疼痛厌恶通过促进传入激活,导致减少C-LTMR-mediated享乐触摸处理和正常镇痛功能的损失(Liljencrantz Olausson, 2014)。可塑性在SCI后疼痛影响和RR反应可能有不同的潜在路径(例如,见腾et al ., 1999,2003年)。
显著的限制我们的研究是观察到的差异的大小由光学与机械C-LTMR刺激引发厌恶条件。几种解释基于我们的实验设计可能占的区别。首先,测试频率的增加小鼠接受刷刺激(每周比在一个5天期间)可以解释这种刺激的较弱的效果观察。出现这种情况,可以构成习惯反复接触刺激,或者敏感的实验环境。后者可能可以解释更大的发达在虚假的控制行为的厌恶老鼠收到刷与那些接受光刺激,可能模糊群刷的差异。第二,很可能减少的长度和post-stimulation会话机械刷实验(10分钟)和后来optogenetic实验根据刷结果的时间(30分钟)是一个关键因素。刷刺激,尽管被调到激活C-LTMRs,无疑将会激活其他感觉传入神经,因而无选择性。因此,第三种可能性是broadly-administered刷刺激可能面具的选择性影响C-LTMR刺激通过激活皮肤传入亚种群,反对或中和C-LTMRs的影响。使用注册会计师范式与我们相似,Chamessian等人最近发现皮肤Aβ-LTMR刺激对厌恶的行为没有影响(Chamessian et al ., 2019)。
目前的研究表明皮肤机械性感受器可以推动SCI后痛苦的行为。以前虽然有证据表明non-nociceptor Aβ传入纤维可以进行表型转换为炎症性超敏反应(诺伊曼et al ., 1996),一个类似属性的变化mechanosensitive non-nociceptors慢性SCI疼痛还没有被证明。虽然我们已经建立了充足的C-LTMR刺激诱导一个厌恶CPA反应,未来的研究应该光抑制C-LTMRs建立必要的(例如,在TH-crossed archaerhodopsin-expressing老鼠),从而充分评估因果关系。研究也应该调查是否痛苦神经反应在这些转基因模型减毒。
我们的结果强烈支持最近的研究证明C-LTMRs转换成pain-transmitting传入后损伤(密封et al ., 2009;Mahns Nagi, 2013;Liljencrantz Olausson, 2014)。除了这个至关重要的观察,我们提供了第一个试验证据表明C-LTMRs有助于唤起,SCI后情感痛苦。通过利用一种新颖的和可行的行为范式,结合optogenetic技术,我们表明,C-LTMR激活足以在层次SCI后神经性疼痛。此外,我们报告C-LTMR刺激和呼吸之间的复杂的相互作用,通过RRs评估。具有抑制受损。延伸像情感痛苦,RRs升高反抗放缓呼吸等操作可以提供自愿门户自主神经系统控制(高贵和招聘2019人),以减少疼痛过敏,可能通过直接抑制C-LTMRs。例如,操作培训啮齿动物减缓他们的呼吸减少对疼痛刺激的敏感性(高贵的et al ., 2017),是一个很有前景的操作,可能需要进一步调查。最后,本研究的方法和结果为研究提供一个基础的周边和中央机制SCI-induced疼痛可能最终转化为人类治疗疼痛控制的新选项。
数据可用性声明
原始数据支持了本文的结论将由作者提供,没有过度的预订。
道德声明
动物研究是审查和批准的动物保健和使用委员会埃默里大学。
作者的贡献
SMG和DJN设计研究。DJN、SMG、SP、行星和RD进行研究和分析数据。DJN, SMG、SP和行星写了这篇文章。所有作者的文章和批准提交的版本。
资金
这项研究受到了资金从国防部(DoD)脊髓损伤研究项目(SCIRP)授予SC140210和NIH(研究所)授予5 r01ns102850-03, SMG。支持的MMRRC JAX研究基础设施项目/办公室主任办公室(批准号OD010921)的美国国立卫生研究院。
确认
我们要感谢威廉·n·Goolsby(埃默里大学)等技术帮助构建注册会计师设备,提供远程(EPIC)传感器实验使用,和开发虚拟仪器程序实时RR监测和数据收集;和肖恩·哈克曼Makalele教务长(埃默里大学)进行电生理记录。
的利益冲突
作者声明,这项研究是在没有进行任何商业或财务关系可能被视为一个潜在的利益冲突。
出版商的注意
本文表达的所有索赔仅代表作者,不一定代表的附属组织,或出版商、编辑和审稿人。任何产品,可以评估在这篇文章中,或声称,可能是由其制造商,不保证或认可的出版商。
引用
安德鲁,d . (2010)。低门槛的定量表征机械感受器板我spinoparabrachial神经元在大鼠输入。j .杂志。588年,117 - 124。doi: 10.1113 / jphysiol.2009.181511
Baastrup C。,和Finnerup: B。(2008). Pharmacological management of neuropathic pain following spinal cord injury.中枢神经系统药物22日,455 - 475。doi: 10.2165 / 00023210-200822060-00002
Bagdas D。,Muldoon, P. P., AlSharari, S., Carroll, F. I., Negus, S. S., and Damaj, M. I. (2016). Expression and pharmacological modulation of visceral pain-induced conditioned place aversion in mice.神经药理学102年,236 - 243。doi: 10.1016 / j.neuropharm.2015.11.024
Barasi, S。,和Lynn, B. (1986). Effects of sympathetic stimulation on mechanoreceptive and nociceptive afferent units from the rabbit pinna.大脑Res。378年,-。0006 - 8993 . doi: 10.1016 / (86) 90282 - 9
低音部,d . M。,Fisher, L. C., Anderson, A. J., Jakeman, L. B., McTigue, D. M., and Popovich, P. G. (2006). Basso Mouse Scale for locomotion detects differences in recovery after spinal cord injury in five common mouse strains.j .创伤23日,635 - 659。doi: 10.1089 / neu.2006.23.635
很大程度上,美国年代。杨问。,Crook, R. J., Du, J., Wu, Z., Fishman, H. M., et al. (2010). Chronic spontaneous activity generated in the somata of primary nociceptors is associated with pain-related behavior after spinal cord injury.j . >。14870 - 14882年。doi: 10.1523 / jneurosci.2428 - 10.2010
Bessou, P。,Burgess, P. R., Perl, E. R., and Taylor, C. B. (1971). Dynamic properties of mechanoreceptors with unmyelinated (C) fibers.j . Neurophysiol。34岁,116 - 131。doi: 10.1152 / jn.1971.34.1.116
Chamessian,。松田,M。,年轻,M。王,M。,Zhang, Z. J., Liu, D., et al. (2019). Is optogenetic activation of vglut1-positive abeta low-threshold mechanoreceptors sufficient to induce tactile allodynia in mice after nerve injury?j . >。39岁,6202 - 6215。doi: 10.1523 / jneurosci.2064 - 18.2019
Chaplan, s R。巴赫,f·W。,Pogrel, J. W., Chung, J. M., and Yaksh, T. L. (1994). Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.j . >。方法53岁,55 - 63。0165 - 0270 . doi: 10.1016 / (94) 90144 - 9
克里斯坦森,m D。,和Hulsebosch, C. E. (1997). Chronic central pain after spinal cord injury.j .创伤14日,517 - 537。doi: 10.1089 / neu.1997.14.517
钟,K。,Lee, B. H., Yoon, Y. W., and Chung, J. M. (1996). Sympathetic sprouting in the dorsal root ganglia of the injured peripheral nerve in a rat neuropathic pain model.j . Comp。神经。376年,241 - 252。doi: 10.1002 / (SICI) 1096 - 9861 (19961209) 376:2 < 241:: AID-CNE6 > 3.0.CO; 2 - 3
皇冠,e D。,你们,Z。,Johnson, K. M., Xu, G. Y., McAdoo, D. J., and Hulsebosch, C. E. (2006). Increases in the activated forms of ERK 1/2, p38 MAPK and CREB are correlated with the expression of at-level mechanical allodynia following spinal cord injury.经验,神经。199年,397 - 407。doi: 10.1016 / j.expneurol.2006.01.003
Culman, J。,Ritter, S., Ohlendorf, C., Haass, M., Maser-Gluth, C., Spitznagel, H., et al. (1997). A new formalin test allowing simultaneous evaluation of cardiovascular and nociceptive responses.可以。j .杂志。杂志。75年,1203 - 1211。
Delfini, m . C。,Mantilleri, A., Gaillard, S., Hao, J., Reynders, A., Malapert, P., et al. (2013). TAFA4, a chemokine-like protein, modulates injury-induced mechanical and chemical pain hypersensitivity in mice.细胞的代表。5,378 - 388。doi: 10.1016 / j.celrep.2013.09.013
Detloff, m R。史密斯,e . J。,Quiros Molina, D., Ganzer, P. D., and Houle, J. D. (2014). Acute exercise prevents the development of neuropathic pain and the sprouting of non-peptidergic (GDNF- and artemin-responsive) c-fibers after spinal cord injury.经验,神经。38 - 48。255年,doi: 10.1016 / j.expneurol.2014.02.013
费利克斯·e·R。,Cruz-Almeida, Y., and Widerstrom-Noga, E. G. (2007). Chronic pain after spinal cord injury: what characteristics make some pains more disturbing than others?j . Rehabil。研究开发。44岁,703 - 715。doi: 10.1682 / jrrd.2006.12.0162
Finnerup: B。,Johannesen, I. L., Fuglsang-Frederiksen, A., Bach, F. W., and Jensen, T. S. (2003). Sensory function in spinal cord injury patients with and without central pain.大脑126年,57 - 70。大脑/ awg007 doi: 10.1093 /
Finnerup: B。,Johannesen, I. L., Sindrup, S. H., Bach, F. W., and Jensen, T. S. (2001). Pain and dysesthesia in patients with spinal cord injury: a postal survey.脊髓39岁,256 - 262。doi: 10.1038 / sj.sc.3101161
高,y . J。,和Ji, R. R. (2009). c-Fos and pERK, which is a better marker for neuronal activation and central sensitization after noxious stimulation and tissue injury?开放的疼痛J。2,17岁。doi: 10.2174 / 1876386300902010011
Garraway, s M。龟,j . D。Huie, j . R。李,k . H。,Hook, M. A., Woller, S. A., et al. (2011). Intermittent noxious stimulation following spinal cord contusion injury impairs locomotor recovery and reduces spinal brain-derived neurotrophic factor-tropomyosin-receptor kinase signaling in adult rats.神经科学199年,86 - 102。doi: 10.1016 / j.neuroscience.2011.10.007
Garraway, s M。Woller, s。Huie, j . R。,Hartman, J. J., Hook, M. A., Miranda, R. C., et al. (2014). Peripheral noxious stimulation reduces withdrawal threshold to mechanical stimuli after spinal cord injury: role of tumor necrosis factor alpha and apoptosis.疼痛155年,2344 - 2359。doi: 10.1016 / j.pain.2014.08.034
格兰特,j。,和Rainville, P. (2009). Pain sensitivity and analgesic effects of mindful states in Zen meditators: a cross-sectional study.Psychosom。地中海。71年,106 - 114。doi: 10.1097 / PSY.0b013e31818f52ee
检,h·J。Janig, W。,和Koltzenburg, M. (1987). Activation of unmyelinated afferents in chronically lesioned nerves by adrenaline and excitation of sympathetic efferents in the cat.>。列托人。82年,35 - 40。0304 - 3940 . doi: 10.1016 / (87) 90167 - 4
胡,s . J。,Yang, H. J., Jian, Z., Long, K. P., Duan, Y. B., Wan, Y. H., et al. (2000). Adrenergic sensitivity of neurons with non-periodic firing activity in rat injured dorsal root ganglion.神经科学101年,689 - 698。doi: 10.1016 / s0306 - 4522 (00) 00414 - 0
胡,S。,和Zhu, J. (1989). Sympathetic facilitation of sustained discharges of polymodal nociceptors.疼痛38岁,85 - 90。0304 - 3959 . doi: 10.1016 / (89) 90077 - 8
无角的,M。陆,P。,Cummons, T. A., and Whiteside, G. T. (2008). The persistence of a long-term negative affective state following the induction of either acute or chronic pain.疼痛140年,436 - 445。doi: 10.1016 / j.pain.2008.09.020
杰克逊,a, B。,和Groomes, T. E. (1994). Incidence of respiratory complications following spinal cord injury.拱门。理论物理。地中海,Rehabil。75年,270 - 275。0003 - 9993 . doi: 10.1016 / (94) 90027 - 2
Janig, W。,Levine, J. D., and Michaelis, M. (1996). Interactions of sympathetic and primary afferent neurons following nerve injury and tissue trauma.掠夺。大脑Res。113年,161 - 184。doi: 10.1016 / s0079 - 6123 (08) 61087 - 0
Kambrun C。,Roca-Lapirot, O., Salio, C., Landry, M., Moqrich, A., and Le Feuvre, Y. (2018). TAFA4 reverses mechanical allodynia through activation of GABAergic transmission and microglial process retraction.细胞的代表。22日,2886 - 2897。doi: 10.1016 / j.celrep.2018.02.068
Kinnman E。,和Levine, J. D. (1995a). Involvement of the sympathetic postganglionic neuron in capsaicin-induced secondary hyperalgesia in the rat.神经科学65年,283 - 291。doi: 10.1016 / j . 0306 - 4522 (94) 00474 -
Kinnman E。,和Levine, J. D. (1995b). Sensory and sympathetic contributions to nerve injury-induced sensory abnormalities in the rat.神经科学64年,751 - 767。0306 - 4522 . doi: 10.1016 / (94) 00435 - 8
李,L。,Rutlin, M., Abraira, V. E., Cassidy, C., Kus, L., Gong, S., et al. (2011). The functional organization of cutaneous low-threshold mechanosensory neurons.细胞147年,1615 - 1627。doi: 10.1016 / j.cell.2011.11.027
Liljencrantz, J。,Bjornsdotter, M., Morrison, I., Bergstrand, S., Ceko, M., Seminowicz, D. A., et al. (2013). Altered C-tactile processing in human dynamic tactile allodynia.疼痛154年,227 - 234。doi: 10.1016 / j.pain.2012.10.024
Liljencrantz, J。,和Olausson, H。(2014). Tactile C fibers and their contributions to pleasant sensations and to tactile allodynia.前面。Behav。>。37。doi: 10.3389 / fnbeh.2014.00037
Liljencrantz, J。Strigo,我。,Ellingsen, D. M., Kramer, H. H., Lundblad, L. C., Nagi, S. S., et al. (2017). Slow brushing reduces heat pain in humans.欧元。j .疼痛21日,1173 - 1185。doi: 10.1002 / ejp.1018
凉廊,m . L。朱诺,M。,和Bushnell, M. C. (2011). Autonomic responses to heat pain: heart rate, skin conductance and their relation to verbal ratings and stimulus intensity.疼痛152年,592 - 598。doi: 10.1016 / j.pain.2010.11.032
Loken, l·S。,Wessberg, J., Morrison, I., McGlone, F., and Olausson, H. (2009). Coding of pleasant touch by unmyelinated afferents in humans.Nat。>。12日,547 - 548。doi: 10.1038 / nn.2312
卢,S。,Duan, B., Vong, L., Lowell, B. B., and Ma, Q. (2013). Runx1 controls terminal morphology and mechanosensitivity of VGLUT3-expressing C-mechanoreceptors.j . >。33岁,870 - 882。doi: 10.1523 / jneurosci.3942 - 12.2013
Mahns, d . A。,和Nagi, S。(2013). An investigation into the peripheral substrates involved in the tactile modulation of cutaneous pain with emphasis on the C-tactile fibres.Exp。大脑Res。227年,457 - 465。doi: 10.1007 / s00221 - 013 - 3521 - 5
马丁,K . K。,高贵的,d . J。帕文,S。张成泽,K。,和Garraway, s M。(2022). Pharmacogenetic inhibition of TrkB signaling in adult mice attenuates mechanical hypersensitivity and improves locomotor function after spinal cord injury.前面。细胞。>。16:987236。doi: 10.3389 / fncel.2022.987236
马丁,K . K。帕文,S。,和Garraway, s M。(2019). Peripheral inflammation accelerates the onset of mechanical hypersensitivity after spinal cord injury and engages tumor necrosis factor alpha signaling mechanisms.j .创伤36岁,2000 - 2010。doi: 10.1089 / neu.2018.5953
Nagi, S。,和Mahns, d . A。(2013). C-tactile fibers contribute to cutaneous allodynia after eccentric exercise.j .疼痛14日,538 - 548。doi: 10.1016 / j.jpain.2013.01.009
Nagi, S。,Rubin, T. K., Chelvanayagam, D. K., Macefield, V. G., and Mahns, D. A. (2011). Allodynia mediated by C-tactile afferents in human hairy skin.j .杂志。589年,4065 - 4075。doi: 10.1113 / jphysiol.2011.211326
Neumann年代。,Doubell, T. P., Leslie, T., and Woolf, C. J. (1996). Inflammatory pain hypersensitivity mediated by phenotypic switch in myelinated primary sensory neurons.自然384年,360 - 364。doi: 10.1038 / 384360 a0
高贵的,d . J。,Goolsby, W. N., Garraway, S. M., Martin, K. K., and Hochman, S. (2017). Slow breathing can be operantly conditioned in the rat and may reduce sensitivity to experimental stressors.前面。杂志。8:854。doi: 10.3389 / fphys.2017.00854
高贵的,d . J。,和Hochman, S. (2019). Hypothesis: pulmonary afferent activity patterns during slow, deep breathing contribute to the neural induction of physiological relaxation.前面。杂志。10:1176。doi: 10.3389 / fphys.2019.01176
高贵的,d . J。,马丁,K . K。帕文,S。,和Garraway, s M。(2019). Spontaneous and stimulus-evoked respiratory rate elevation corresponds to development of allodynia in spinal cord-injured rats.j .创伤36岁,1909 - 1922。doi: 10.1089 / neu.2018.5936
Oatway, m·A。陈,Y。,和韦弗,l . C。(2004). The 5-HT3 receptor facilitates at-level mechanical allodynia following spinal cord injury.疼痛110年,259 - 268。doi: 10.1016 / j.pain.2004.03.040
Olausson, H。,Lamarre, Y., Backlund, H., Morin, C., Wallin, B. G., Starck, G., et al. (2002). Unmyelinated tactile afferents signal touch and project to insular cortex.Nat。>。5,900 - 904。doi: 10.1038 / nn896
帕文,S。,Williams, C. R., Jarrett, S. A., and Garraway, S. M. (2021). Spinal cord injury increases pro-inflammatory cytokine expression in kidney at acute and sub-chronic stages.炎症44岁,2346 - 2361。doi: 10.1007 / s10753 - 021 - 01507 - x
Pertens E。,Urschel-Gysbers, B. A., Holmes, M., Pal, R., Foerster, A., Kril, Y., et al. (1999). Intraspinal and behavioral consequences of nerve growth factor-induced nociceptive sprouting and nerve growth factor-induced hyperalgesia compared in adult rats.j . Comp。神经。410年,73 - 89。
ibsen Pinheiro f·德·V。,Villarinho, J. G., Silva, C. R., Oliveira, S. M., Pinheiro, K. de V., Petri, D., et al. (2015). The involvement of the TRPA1 receptor in a mouse model of sympathetically maintained neuropathic pain.欧元。j .杂志。747年,105 - 113。doi: 10.1016 / j.ejphar.2014.11.039
ram, m . S。,和Bisby, M. A. (1997). Rapid sprouting of sympathetic axons in dorsal root ganglia of rats with a chronic constriction injury.疼痛70年,237 - 244。doi: 10.1016 / s0304 - 3959 (97) 03331 - 9
ram, m . S。,Thompson, S. W. N., and McMahon, S. B. (1999). Causes and consequences of sympathetic basket formation in dorsal root ganglia.疼痛82年,S111-S120。doi: 10.1016 / s0304 - 3959 (99) 00144 - x
Refsgaard l·K。,Hoffmann-Petersen, J., Sahlholt, M., Pickering, D. S., and Andreasen, J. T. (2016). Modelling affective pain in mice: effects of inflammatory hypersensitivity on place escape/avoidance behaviour, anxiety and hedonic state.j . >。方法262年,85 - 92。doi: 10.1016 / j.jneumeth.2016.01.019
罗伯茨,w·J。,和Elardo, S. M. (1985). Sympathetic activation of unmyelinated mechanoreceptors in cat skin.大脑Res。339年,123 - 125。0006 - 8993 . doi: 10.1016 / (85) 90629 - 8
罗伯茨,w·J。,和Levitt, G. R. (1982). Histochemical evidence for sympathetic innervation of hair receptor afferents in cat skin.j . Comp。神经。210年,204 - 209。doi: 10.1002 / cne.902100211
Ruocco,我。,Cuello, A. C., and Ribeiro-Da-Silva, A. (2000). Peripheral nerve injury leads to the establishment of a novel pattern of sympathetic fibre innervation in the rat skin.j . Comp。神经。422年,287 - 296。doi: 10.1002 / (sici) 1096 - 9861 (20000626) 422:2 < 287:: aid-cne9 > 3.0.co;双电子
Santuzzi, c . H。,否决权Hde,。皮雷,j·G。,Goncalves, W. L., Gouvea, S. A., and Abreu, G. R. (2013). High-frequency transcutaneous electrical nerve stimulation reduces pain and cardio-respiratory parameters in an animal model of acute pain: participation of peripheral serotonin.Physiother。Pract理论。29日,630 - 638。doi: 10.3109 / 09593985.2013.774451
佐藤,J。,和Perl, E. R. (1991). Adrenergic excitation of cutaneous pain receptors induced by peripheral nerve injury.科学251年,1608 - 1610。doi: 10.1126 / science.2011742
佐藤,J。,Suzuki, S., Iseki, T., and Kumazawa, T. (1993). Adrenergic excitation of cutaneous nociceptors in chronically inflamed rats.>。列托人。164年,225 - 228。0304 - 3940 . doi: 10.1016 / (93) 90897 - t
密封,r . P。王,X。关,Y。,Raja, S. N., Woodbury, C. J., Basbaum, A. I., et al. (2009). Injury-induced mechanical hypersensitivity requires C-low threshold mechanoreceptors.自然462年,651 - 655。doi: 10.1038 / nature08505
Shinder, V。,Govrin-Lippmann, R., Cohen, S., Belenky, M., Ilin, P., Fried, K., et al. (1999). Structural basis of sympathetic-sensory coupling in rat and human dorsal root ganglia following peripheral nerve injury.j . Neurocytol。28日,743 - 761。doi: 10.1023 /: 1007090105840
西达,p . J。,和Loeser, J. D. (2001). Pain following spinal cord injury.脊髓39岁,63 - 73。doi: 10.1038 / sj.sc.3101116
西达,p . J。,McClelland, J. M., Rutkowski, S. B., and Cousins, M. J. (2003). A longitudinal study of the prevalence and characteristics of pain in the first 5 years following spinal cord injury.疼痛103年,249 - 257。doi: 10.1016 / s0304 - 3959 (02) 00452 - 9
Tanimoto, K。,Takebayashi, T., Kobayashi, T., Tohse, N., and Yamashita, T. (2011). Does norepinephrine influence pain behavior mediated by dorsal root ganglia?: a pilot study.中国。.中国。遗传代数。Res。469年,2568 - 2576。doi: 10.1007 / s11999 - 011 - 1798 - x
腾,y D。,Bingaman, M., Taveira-DaSilva, A. M., Pace, P. P., Gillis, R. A., and Wrathall, J. R. (2003). Serotonin 1A receptor agonists reverse respiratory abnormalities in spinal cord-injured rats.j . >。23日,4182 - 4189。doi: 10.1523 / jneurosci.23 - 10 - 04182.2003
腾,y D。,Mocchetti, I., Taveira-DaSilva, A. M., Gillis, R. A., and Wrathall, J. R. (1999). Basic fibroblast growth factor increases long-term survival of spinal motor neurons and improves respiratory function after experimental spinal cord injury.j . >。19日,7037 - 7047。doi: 10.1523 / jneurosci.19 - 16 - 07037.1999
Vrontou, S。,Wong, A. M., Rau, K. K., Koerber, H. R., and Anderson, D. J. (2013). Genetic identification of C fibres that detect massage-like stroking of hairy skin在活的有机体内。自然493年,669 - 673。doi: 10.1038 / nature11810
韦弗,l . C。,Verghese, P., Bruce, J. C., Fehlings, M. G., Krenz, N. R., and Marsh, D. R. (2001). Autonomic dysreflexia and primary afferent sprouting after clip-compression injury of the rat spinal cord.j .创伤18日,1107 - 1119。doi: 10.1089 / 08977150152693782
狼,年代。,和Hardy, J. D. (1941). Studies on pain. Observations on pain due to local cooling and on factors involved in the “cold pressor” effect.j .中国。投资。20岁,521 - 533。doi: 10.1172 / JCI101245
吴,Z。,李,L。,Xie, F., Du, J., Zuo, Y., Frost, J. A., et al. (2017). Activation of KCNQ channels suppresses spontaneous activity in dorsal root ganglion neurons and reduces chronic pain after spinal cord injury.j .创伤34岁,1260 - 1270。doi: 10.1089 / neu.2016.4789
徐,Q。,Garraway, s M。,Weyerbacher, A. R., Shin, S. J., and Inturrisi, C. E. (2008). Activation of the neuronal extracellular signal-regulated kinase 2 in the spinal cord dorsal horn is required for complete Freund’s adjuvant-induced pain hypersensitivity.j . >。28日,14087 - 14096。doi: 10.1523 / jneurosci.2406 - 08.2008
杨问。,吴,Z。Z., Hadden, J. K., Odem, M. A., Zuo, Y., Crook, R. J., et al. (2014). Persistent pain after spinal cord injury is maintained by primary afferent activity.j . >。34岁,10765 - 10769。doi: 10.1523 / jneurosci.5316 - 13.2014
Yezierski, r . P。Yu, c·G。,Mantyh, P. W., Vierck, C. J., and Lappi, D. A. (2004). Spinal neurons involved in the generation of at-level pain following spinal injury in the rat.>。列托人。361年,232 - 236。doi: 10.1016 / j.neulet.2003.12.035
张,人类。李,H。,和Munir, M. A. (2004). Decreasing sympathetic sprouting in pathologic sensory ganglia: a new mechanism for treating neuropathic pain using lidocaine.疼痛109年,143 - 149。doi: 10.1016 / j.pain.2004.01.033
郑,Q。谢,W。,Luckemeyer, D. D., Lay, M., Wang, X. W., Dong, X., et al. (2022). Synchronized cluster firing, a distinct form of sensory neuron activation, drives spontaneous pain.神经元110年,209 - 220. - e6。doi: 10.1016 / j.neuron.2021.10.019
关键词:C-low阈值的机械(C-LTMRs),脊髓损伤(SCI),慢性情感疼痛、呼吸速率(RR),条件性位置厌恶(CPA)
引用:高贵的DJ, Dongmo R,帕文年代,马丁KK和Garraway SM (2022) C-low阈值机械感受器激活就足以引发情感痛小鼠脊髓人与呼吸速率增加。前面。中国。>。16:1081172。doi: 10.3389 / fnint.2022.1081172
收到:2022年10月26日;接受:2022年11月25日;
发表:2022年12月21日
编辑:
Michelino Puopolo美国纽约州立大学石溪分校版权©2022高贵,Dongmo帕文,马丁和Garraway。这是一个开放分布式根据文章知识共享归属许可(CC)。使用、分发或复制在其他论坛是允许的,提供了原始作者(年代)和著作权人(s)认为,最初发表在这个期刊引用,按照公认的学术实践。没有使用、分发或复制是不符合这些条件的允许。
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