利用Jurkat报告T细胞系评估新型嵌合抗原受体的功能

Farhana贾汗 ¹，1月。 ¹，戴安娜Schenkwein ²，Seppo Yla-Herttuala ^3.，Helka美好¹， Sini Huuskonen ⁴，马库- Varjosalo ⁴，Pilvi Maliniemi⁵， 朱迪思•莱特纳 ⁶，彼得·斯坦伯格 ⁶，Hans-Jorg布 ⁷，金正日Vettenranta ⁸而且马蒂·Korhonen^{1 *}

• ¹iCELL集团，芬兰红十字血液服务中心研发部，芬兰
• ²A.I维尔塔宁分子科学研究所，东芬兰大学，芬兰
• ^3.转化癌症医学研究项目，东芬兰大学，芬兰
• ⁴芬兰赫尔辛基大学HiLIFE生物技术研究所
• ⁵芬兰红十字会血液服务中心，芬兰
• ⁶奥地利维也纳医科大学病理生理学、感染学和免疫学中心免疫学研究所免疫受体和T细胞激活部
• ⁷德国Tübingen大学，Tübingen大学诊所，内科二系
• ⁸芬兰赫尔辛基大学中心医院

背景
用嵌合抗原受体(CAR)基因修饰的T细胞有望用于癌症的免疫治疗。目前，人们正在努力提高CAR - T细胞治疗液体和固体肿瘤的安全性和有效性。早些时候，我们设计了一种新的CAR主干(FiCAR)，其中间隔体来自信号调节蛋白α (SIRPα)的免疫球蛋白(Ig)样结构域。然而，利用原代T细胞分析新型car是缓慢而费力的。
方法
为了探索CAR主干的多功能性，我们设计了一组具有不同间隔长度和靶向抗原的变体FiCARs。为了加快对新型CARs的分析，我们使用慢病毒将FiCAR基因转导到携带荧光报告基因的Jurkat报告细胞中。流式细胞仪分析了荧光标记物在FiCAR与靶细胞接合时的表达，并使用杀伤试验评估了细胞毒性。此外，通过质谱磷蛋白组学分析FiCAR信号通路的细胞内通路。
结果
七种不同的CARs被设计并转导到Jurkat报告细胞中。我们发现，利用识别SIRPα的SE12B6A4抗体，流式细胞仪可以检测SIRPα来源的FiCARs。此外，FiCAR的参与导致NFκβ和NFAT信号的强烈激活。有趣的是，Jurkat报告系统也揭示了HER-2靶向FiCAR的补性信号。装有ficar的Jurkat T细胞在与靶细胞共培养时具有细胞毒性，靶细胞接触导致Jurkat报告T细胞表面CD107a的上调。磷酸化蛋白组学分析证实，FiCAR1与其抗原相互作用后，通过细胞内CD28/CD3ζ序列进行信号转导。此外，还观察到CD3ζ/ZAP70- SLP-76-PLCγ、PI3K-AKT-NFκB通路的下游信号通路以及NFAT和AP-1的激活。
结论
我们得出的结论是，FiCAR的骨架可以通过1到3个SIRPα衍生的Ig-like结构域随意缩短和延长，并且当配备不同的单链可变片段目标结合结构域时，FiCAR是有效的。Jurkat报告系统加速了对新型car的表达、信号功能、紧张信号问题的评估和细胞毒活性的分析。