原始研究的文章

前面。地中海,2023年1月10日
秒。皮肤
卷9 - 2022 | https://doi.org/10.3389/fmed.2022.1042015

湿润烧伤膏加速糖尿病引起的通过促进愈合的伤口愈合

Yuanxun龚 ^1、2,

燕江³,

Jinmei黄⁴,

Zuofen他⁵和

Qianli唐^{1、2 *}

¹综合中西医学院、湖南中医药大学,长沙,湖南、中国
²右江民族医科大学的附属医院,中国百色
³西部广西重点实验室高发疾病的预防和治疗,中国百色市右江民族医科大学
⁴研究生院、广西中医药大学、中国南宁
⁵研究生院,中国百色市右江民族医科大学

背景:糖尿病引起的创伤的发病率普遍存在,治疗是具有挑战性的。我们发现,湿润烧伤膏(烧伤)促进糖尿病引起的创伤的愈合,但机制尚不清楚。

方法:本研究旨在探讨湿润烧伤膏在糖尿病伤口愈合的机制,可能与促进组织愈合。全层皮肤切除模型建立在链脲霉素(STZ)糖尿病大鼠全身。湿润烧伤膏和Kangfuxin (KFX)应用于伤口面积,和拍摄的伤口愈合率进行了分析。肉芽组织和表皮厚度、胶原重构速度,和细胞角蛋白的表达10 (CK10)、细胞角蛋白14 (CK14) Ki67,胶原蛋白,第三和胶原蛋白的再生皮肤被他走时发现染色,马森染色,分别和免疫荧光染色。湿润烧伤膏和KFX人类永生的角化细胞(HaCaT),小鼠皮肤成纤维细胞(MDF),和细胞生存能力,细胞迁移和分化是由CCK-8,挠试验,RT-qPCR,分别和免疫印迹(WB)。

结果:我们发现,湿润烧伤膏显著促进了伤口肉芽组织的形成和糖尿病大鼠胶原重塑。的应用湿润烧伤膏糖尿病伤口不仅促进了毛囊和皮脂腺的形成也促进了Ki67的表达式,CK10和CK14表皮细胞。湿润烧伤膏对角质细胞的分化过程没有明显的影响。

结论:我们的研究进一步证明,湿润烧伤膏在糖尿病伤口愈合,发挥了积极作用,促进组织愈合能力可以促进伤口愈合的一个重要原因。

背景

糖尿病患者的数量在2030年预计将增长25% (1)。多达30%的糖尿病患者患糖尿病足溃疡(DFU)一生中(2),这是残疾和死亡的重要原因之一,糖尿病。DFU治愈率低,复发率高,预后不良率高,严重影响糖尿病患者的生活质量和生命周期(3)。与此同时,也会使异常沉重的社会压力,经济和医学(4,5)。

在糖尿病伤口愈合和肢体保全问题吸引了太多的关注在过去的十年中,因为它潜在的严重后果(6)。研究人员关注如何促进糖尿病慢性伤口愈合通过缩短伤口关闭时间,提高成本效益的治疗方案,改善肢体保留(7,8)。近年来,它已被认为最佳的伤口愈合需要相结合的方法来解决各种临床问题(9),比如持续炎症,血管生成不足,受损组织愈合。

大量研究表明,慢性难治性伤口的发展受多种因素的影响(10)。一般来说,伤口修复的过程可以分为三个阶段:炎症、扩散和改造(11)。增殖的阶段是最关键的步骤,伤口修复的过程,其中包括各种细胞的增殖和迁移,包括内皮细胞、成纤维细胞,角质细胞和巨噬细胞。更具体地说,扩散阶段可以分为两个部分,组织愈合和肉芽组织的形成,这是相辅相成的,是密切联系的,互相影响(12)。一般来说,肉芽组织损伤后立即填写组织缺陷,和表皮逐渐覆盖伤口完全愈合的过程。因此,愈合的伤口愈合的重要标志。但是,先前的研究已经表明,角化细胞不能及时迁移和覆盖在伤口上,但形式过度增生上皮细胞在伤口的边缘,这是其中一个重要原因是一小块没有治愈糖尿病伤口(13,14)。

湿润烧伤膏是烧伤创面外用软膏和慢性难治性伤口,已被广泛使用,因为它不寻常的临床效果(15,16)。因此,一些研究人员应用湿润烧伤膏对糖尿病引起的慢性伤口和取得了良好的效果17)。在这项研究中,我们表明,外用湿润烧伤膏可以引起伤口愈合和胶原重构促进伤口愈合的皮肤全层切除糖尿病大鼠模型。此外,探讨湿润烧伤膏促进糖尿病慢性伤口愈合的机制,我们研究了湿润烧伤膏对扩散的影响,人类角质细胞分化和迁移(HaCaT)。

材料和方法

动物

所有动物实验协议被批准的动物保健和使用委员会右江民族医科大学,百色,中国(2021030103)。所有的作者是这个委员会的成员。照顾动物的指导方针是美国国家卫生研究院(NIH)和中国国家卫生研究所。雄性C57BL / 6小鼠(8周)获得从长沙Tianqin生物技术有限公司有限公司(长沙,中国)。老鼠被安置在单独的通风笼与颗粒食物和水。动物房房间被保持在一个恒定的温度20°C-24°C,湿度45% - -65%的12 h光/暗周期在整个研究。所有外科手术干预措施进行麻醉三溴乙醇为2.5%(250毫克/公斤体重),使用一个标准化的协议建立在我们的实验室。所有的努力都是减少实验用动物的数量,以减少动物不适。

隔离和MDF的文化

皮肤成纤维细胞分离从后面新生C57BL / 6小鼠皮肤的健康。的皮肤洗了PBS和0.01% 1型胶原酶消化0.1%胰蛋白酶(Sigma-Aldrich;圣路易斯,密苏里州,美国)30∼60分钟37°C。消化是终止的一个完整的DMEM培养基。成纤维细胞是由离心收集在一个完整的DMEM培养基培养,后来在37°C公司5%₂在使用前的气氛。

细胞培养

HaCaT细胞从细胞购买银行的中国科学院(中国上海)。HaCaT和MDF细胞生长在high-glucose杜尔贝科修改鹰的介质(DMEM)含10%胎牛血清(的边后卫;Euroclone,佩罗,意大利)和1%青霉素和链霉素(Gibco,表达载体的生活技术,美国朱利亚诺米兰,意大利)。细胞培养在37°C公司5%₂的气氛。细胞培养基是每周更换2次。0.1 g湿润烧伤膏(汕头美宝制药有限公司,中国)与1毫升DMSO溶液混合,由超声波辅助溶解,过滤,debacterialized溶解在DMEM后续细胞实验。Kangfuxing (Haoyisheng,四川,中国)溶解在DMEM之前被用于随后的细胞实验。

老鼠伤口模型和治疗

老鼠被随机分配到非糖尿病和糖尿病组。模拟人类2型糖尿病,糖尿病老鼠伤口模型建立了高脂肪饮食+腹腔内注射链脲菌素(150毫克/公斤体重)。测量血糖水平在4日,5日和6日注射STZ后一天。小鼠空腹血糖为16.7 L更易与此同时与多尿症的症状,烦渴,体重的增加被认为是糖尿病的一个成功的模型。剃背区域的老鼠,一个切除伤口直径10毫米了背胸用手术刀刀虽然三溴乙醇麻醉下的动物。非糖尿病组的老鼠被应用生理盐水治疗伤口。老鼠在糖尿病组进一步被随机分配到湿润烧伤膏,KFX,糖尿病组和应用湿润烧伤膏(0.2克/厘米²),Kangfuxin液体(0.2毫升/厘米²),生理盐水一次3天,7、10、14天,分别用棉签从伤口周围均匀和传播的中心。伤口愈合被捕的数码照片与数码相机的常规时间点在一个相等的距离和校准范围内。伤口面积关闭由ImageJ软件决定。3天、7、10、14日在每组小鼠安乐死颈椎脱位,和皮肤标本是收获。伤口闭合率计算的伤口关闭百分比(%)= (n)天(区天0区/区域0]天×100%。

测量在受伤区域表层水分损失

表皮水分损失(TEWL)利率受伤的老鼠用TM300探测器测量领域,附加到Courage-Khazaka MPA5系统(勇气& Khazaka,科隆,德国)在控制大气条件下(23°C,相对湿度60%)在第三天,7、10、14后伤口。测量由把探测放在受伤的区域,这个区域定位在中间。测量前被湿润烧伤膏/ KFX /生理盐水应用程序。

组织学分析和免疫荧光染色

与4%多聚甲醛溶液固定后24 h,样本脱水,嵌入在石蜡,然后切成5μm部分。马森的三色的染色和苏木精和伊红染色(他)进行组织幻灯片。组织幻灯片使用FSX100显微镜成像(奥林巴斯、东京、日本)。三个区域与同一地区选择随机从每个皮肤标本计算表皮厚度、上皮细胞迁移的舌头的长度,和胶原蛋白沉积与ImageJ每个样本。此外,免疫荧光染色细胞角蛋白10 (CK10)和细胞角蛋白14 (CK14) Ki67使用荧光显微镜中观察到表皮(徕卡共焦STELLARIS 5)。

细胞生存能力测量

湿润烧伤膏的效果和KFX细胞生存能力是衡量CCK-8化验(Dojindo、日本)。短暂,HaCat / MDF细胞被添加到96 -孔板和培养48 h。一组是在DMEM培养基培养作为对照。湿润烧伤膏和KFX组的上清液湿润烧伤膏+ DMEM,取而代之的是和KFX + DMEM,有六个平行样品为每个组(100μL文化的解决方案是添加在每个)。48小时后,10μL CCK-8试剂添加到和孵化1 h。450海里的吸光度每个好测量标(美国VT BioTek)。

细胞迁移试验

划痕试验,HaCat和MDF细胞被播种在6-well板块分别在DMEM培养基培养,直到密度达到90%。细胞被渴望8 - 12 h,和丝裂霉素C(西格玛奥德里奇,美国)添加到15μg /毫升的媒介。然后细胞培养在5%的股份有限公司₂孵化器在37°C 3 h,媒介取代正常完成媒介。汇合的层的每个单元格中创建的划痕是通过使用一个无菌P200吸管提示和PBS洗了三次。图像的采集标本12 h和24 h后抓。划痕的宽度进行测量,记录下来,然后与原来的划痕在0 h用倒置显微镜和Image-Pro +软件(美国医疗控制论)。伤口的边缘之间的区域与ImageJ测量软件。

实时定量聚合酶链反应

试剂盒试剂(英杰公司)是用于小鼠皮肤组织的总RNA分离和培养的细胞。互补脱氧核糖核酸合成了FastKing gDNA消除RT SuperMix(天津)和存在是由PreMixPlus SYBR绿色(天津)。3 -磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)和β-actin被用作内部标准。第一步实时PCR系统(美国生活技术,卡尔斯巴德,CA)是用于RT-qPCR反应。和2^-ΔΔCt方法用于相对量化表达式。所有的引物如下:CK-10 5′3′F: ATGTCTGTTCGATACAGCTCAAG;R: CTCCACCAAGGGAGCCTTTG;CK-14 5′3′F: TGGG CAGTGAGAAGGTGAC;R: CAATGGTCTTGAAGTAGGGA CT;GAPDH 5′3′F: GGAAGCTTGTCATCAATGGAAA TC;R: TGATGACCCTTTTGGCTCCC;MMP9: 5′3′F: CTGGACAGCCAGACACTAAAG;接待员:CTCGCGGCAAGTCT TCAGAG;Collagen-I: 5′3′F: GTAACTTCGTGCCTAGCA ACA; R: CCTTTGTCAGAATACTGAGCAGC; Collagen-III: 5′—3′ F: CTGTAACATGGAAACTGGGGAAA; R: CCATA GCTGAACTGAAAACCACC.

免疫印迹分析

蛋白质被里帕缓冲区(表达载体)和分离提取10% sds - page凝胶,转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜,与适当的探索主要抗体特定anti-cytokeratin 10 (CK10;亲和力),anti-cytokeratin 14 (CK14;亲和力),anti-Matrix metalloproteinase-9 (MMP9;Abcam), anti-Collagen-I (Abcam) anti-Collagen-III(亲和力)在4°C一夜之间,和山羊anti-mouse二级抗体在37°C 50分钟。主要包括抗体荧光扫描成像。ImageJ软件被用来分析和处理。

统计分析

所有数据提出了研究来自至少有三个独立的实验和报告为平均值±标准偏差(SD)。GraphPad Prism 8.0软件被用于统计分析。采用双向方差分析比较组间在不同的时间点。单向方差分析与Student-Newman-Keuls测试被用于在一组两两比较。

结果

湿润烧伤膏促进糖尿病小鼠的伤口愈合

研究了湿润烧伤膏对糖尿病的影响伤口,使用STZ诱导糖尿病小鼠和全层皮肤切除模型建立(18)。接下来,我们应用湿润烧伤膏治疗组在糖尿病大鼠伤口面积。同时,我们选择使用KFX作为阳性对照组,以促进伤口愈合(19- - - - - -21)。在治疗期间,我们拍了照在几个时间点记录糖尿病大鼠伤口愈合的过程。我们观察到没有明显优势组在治疗早期在第三天。从第七天,与糖尿病对照组和KFX组相比,湿润烧伤膏组伤口愈合率高,与非糖尿病对照组。在第14天,湿润烧伤膏组伤口完全愈合(图1一个)。

图1

图1所示。湿润烧伤膏促进糖尿病小鼠的伤口愈合。(一)代表图像的外观在每组伤口愈合时间。规模是1000μm。每组小鼠的伤口愈合率被ImageJ定量分析软件。(B)代表他的伤口皮肤染色的图片3、7、10、14天。伤口边缘之间的长度是衡量NIS-Elements查看器。规模是1000μm。(C)表皮水分损失率与TM300测量。糖尿病控制(DB-CTR):糖尿病小鼠在伤口表面用生理盐水治疗。非糖尿病控制(NDB-CTR):正常小鼠与生理盐水治疗伤口表面。KFX:糖尿病小鼠KFX处理伤口表面。湿润烧伤膏:糖尿病小鼠在伤口表面用湿润烧伤膏治疗。每次至少6个独立部分选择为每个组。所有数据显示为±SD, nsP> 0.05,*P< 0.05,* *P< 0.01,* * *P< 0.001,* * * *P< 0.0001。

此外,移行上皮的舌头的长度是衡量)染色再生皮肤组织的伤口在第三天,7,10,14受伤。)染色的结果表明,湿润烧伤膏在糖尿病小鼠,有效促进伤口愈合,伤口愈合的趋势基本上是一致的记录的照片(图1 b)。这些结果表明,湿润烧伤膏具有更强的作用在促进diabetic-associated比KFX伤口愈合。

当皮肤受伤,其屏障功能受损,导致更高的表层水分损失(TEWL),索引来评估皮肤屏障功能在活的有机体内。因此,除了视觉伤口关闭的文档,TEWL试验进行定量确定皮肤屏障功能的重建后的伤口。TEWL试验的结果表明,湿润烧伤膏加速伤口的屏障功能的恢复糖尿病小鼠与糖尿病对照组(相比图1 c)。

湿润烧伤膏加速胶原重塑糖尿病伤口的老鼠

胶原蛋白是细胞外基质的重要组成部分。糖尿病伤口愈合往往伴随着减少胶原重构,从而降低再生皮肤组织的力量和弹性,导致更加脆弱的伤口和不足为细胞支架附件。因此,探讨胶原重塑再生的皮肤在每一组中,我们对伤口进行了马森染色组织切片的每组伤后第14天。结果表明,胶原重构的湿润烧伤膏组高于糖尿病对照组(图2一个)。此外,确认促进湿润烧伤膏对伤口胶原重构的影响,RT-qPCR和世行mRNA和蛋白表达水平的检测第三我胶原蛋白和胶原蛋白的再生皮肤每组小鼠在14天。结果表明,胶原蛋白的表达水平三世烧伤组明显高于糖尿病对照组,而没有显著差异在胶原蛋白的表达水平,我组(中图2 b, C)。但胶原蛋白的比例我:胶原蛋白三世未达到统计上的显著水平。这些结果表明,应用湿润烧伤膏糖尿病伤口促进胶原重塑皮肤再生。

图2

图2。湿润烧伤膏加速胶原重塑糖尿病伤口的老鼠。(一)代表图像的马森染色再生皮肤组织每组的老鼠。规模是50μm。再生皮肤的胶原重塑每组的老鼠被ImageJ定量分析软件。(B)Collagen-I的信使rna相关内容和Collagen-III RT-qPCR的每组进行比较。和的比值Collagen-I: Collagen-III。(C)Collagen-I的蛋白表达和Collagen-III每组由世行决定。和的比值Collagen-I: Collagen-III。GAPDH作为加载控制。的灰度值每一条被ImageJ定量分析软件。至少有三个独立的部分被选择在每个时间每个组。所有数据显示为±SD, nsP> 0.05,*P< 0.05,* *P< 0.01,* * *P< 0.001,* * * *P< 0.0001。

湿润烧伤膏加速肉芽组织的形成和成熟上皮结构在糖尿病伤口

进一步了解湿润烧伤膏对糖尿病的影响伤口,我们执行)上的伤口组织染色和组织学评价手术后第14天。结果表明,再生皮肤组织湿润烧伤膏组更epithelialized比其他三组(图3一)。定量比较不同的组织愈合的程度在每一组中,我们测量的厚度肉芽组织和表皮伤口表面每组并统计分析结果。结果表明,肉芽组织的厚度的湿润烧伤膏组高于糖尿病对照组(图3 b)。类似地,定量统计结果还表明,表皮厚度的湿润烧伤膏组高于糖尿病对照组(图3 c)。

图3

图3。湿润烧伤膏加速肉芽组织的形成和成熟上皮结构在糖尿病伤口。(一)代表图像)染色再生皮肤组织的老鼠在每组手术后第14天。规模是50μm。(B)每组肉芽组织再生的皮肤厚度被ImageJ定量分析软件。(C)再生皮肤的表皮厚度每组由ImageJ定量分析软件。(D)高倍率图像显示了毛囊的形成过程在7天每组,10,14。规模是500μm(10倍)和50μm (40 x)。每组的毛囊数量计算。每次至少6个独立部分选择为每个组。所有数据显示为±SD, nsP> 0.05,*P< 0.05,* *P< 0.01,* * *P< 0.001,* * * *P< 0.0001。

此外,我们集中在圆)的彩色图像伤口组织在第七天,10,14。意外、功能结构如毛囊和皮脂腺首次开发的再生皮肤湿润烧伤膏组的第十天在第14天成熟,表明再生皮肤的湿润烧伤膏组已经基本功能组件(图3 d)。这些结果表明,湿润烧伤膏促进糖尿病伤口愈合和加速成熟上皮结构的形成。

湿润烧伤膏促进组织愈合过程中糖尿病伤口愈合

了解湿润烧伤膏对糖尿病伤口的愈合的影响,我们进行了免疫荧光分析每组的再生皮肤组织部分。Ki67是一个典型的增殖在细胞核内的标记(22)。免疫荧光结果显示积极的Ki67再生表皮的基底细胞层湿润烧伤膏组明显高于糖尿病对照组和KFX集团暗示湿润烧伤膏的积极影响糖尿病伤口愈合(图4一)。CK10通常是表示在成熟表皮基底层细胞,表皮细胞成熟的一个标志(23)。CK14表皮基底层细胞的增殖标记(24)。由于稳定的分布和角蛋白的表达,我们检测到的表达CK10和CK14再生皮肤每组小鼠的免疫荧光染色。结果表明,再生表皮的表达CK10和CK14烧伤组明显高于糖尿病对照组(图4 b, C)。这些结果表明,表皮分化成熟的湿润烧伤膏组高于其他组,表明湿润烧伤膏有一个很好的促进组织愈合的能力。

图4

图4。湿润烧伤膏促进组织愈合过程中糖尿病伤口愈合。(一)代表的免疫荧光图像再生皮肤组织每组的老鼠被共焦显微镜,绿色是Ki67, DAPI,细胞核是蓝色的。的百分比Ki67-positive再生表皮基底层细胞每组的老鼠被ImageJ统计分析软件。(B)代表的免疫荧光图像再生皮肤组织每组的老鼠被共焦显微镜,绿色是CK10, DAPI,细胞核是蓝色的。CK10-positive再生表皮细胞的比例每组的老鼠被ImageJ统计分析软件。(C)代表的免疫荧光图像再生皮肤组织每组的老鼠被共焦显微镜,绿色是CK14, DAPI,细胞核是蓝色的。CK14-positive再生表皮细胞的比例每组的老鼠被ImageJ统计分析软件。规模是50μm。每次至少6个独立部分选择为每个组。所有的数据都显示为意味着我±SD,*P< 0.05,* *P< 0.01,* * *P< 0.001,* * * *P< 0.0001。

湿润烧伤膏加速愈合的过程通过促进角质细胞的迁移

伤口愈合的效率取决于角质细胞的迁移率。不迁徙hyperproliferative角质化细胞的特点是一小块没有治愈糖尿病伤口。因此,湿润烧伤膏对HaCaT细胞迁移的影响被划痕试验评估。类似地,为了客观地评价湿润烧伤膏在HaCaT迁移的影响,我们选择KFX作为积极的控制。CCK-8试验应用湿润烧伤膏和KFX评估的最佳浓度在体外。根据CCK-8化验的结果,湿润烧伤膏解决方案100 ug /毫升的浓度和KFX溶液稀释80倍被应用于实验在体外(图5 a, B)。湿润烧伤膏治疗后血清媒体,更快的伤口关闭HaCaT细胞比另一组细胞观察。完成伤口关闭发生在MEBO-treated HaCaT细胞在24 h,而伤口仍在对照组细胞(图5 c)。此外,MMP9的mRNA和蛋白水平检测到RT-qPCR WB,结果表明,MMP9的表达是上调HaCaT细胞湿润烧伤膏治疗后(图5 d, E)。结果表明,湿润烧伤膏可促进HaCaT细胞的迁移。

图5

图5。湿润烧伤膏加速愈合的过程通过促进角质细胞的迁移。(一)不同浓度的细胞生存能力应用湿润烧伤膏对HaCaT细胞被kit-8测定细胞计数测量。(B)细胞生存能力不同比例的KFX应用于HaCaT细胞通过细胞计数kit-8实验来测定。(C)代表图像的伤口关闭HaCaT细胞在不同时间点在每组是由一个倒置显微镜。规模是100μm。伤口关闭HaCaT细胞的百分比在不同时间点在每一组被ImageJ统计分析软件。(D)MMP9的信使rna相关内容HaCaT每组的细胞被RT-qPCR相比。(E)MMP9在HaCaT细胞的蛋白表达的每组由世行决定。β-actin作为加载控制。的灰度值每一条被ImageJ定量分析软件。(F)HaCaT每组细胞的细胞生存能力是由细胞计数kit-8化验。(G)信使rna相关内容的CK10和CK14 HaCaT每组的细胞被RT-qPCR相比。(H)在HaCaT CK10和CK14细胞的蛋白表达的每组由世行决定。GAPDH作为加载控制。(我)MDF每组细胞的细胞生存能力是由细胞计数kit-8化验。(J)代表图像的伤口关闭MDF细胞在不同时间点在每组是由一个倒置显微镜。规模是100μm。伤口关闭MDF细胞的百分比在不同时间点在每一组被ImageJ统计分析软件。规模是100μm。所有的数据都显示为平均数±标准差,N≥3,nsP> 0.05,*P< 0.05,* *P< 0.01,* * *P< 0.001,* * * *P< 0.0001。

接下来,为了避免伤口闭合期间MEBO-induced扩散,我们评估了湿润烧伤膏对通过CCK-8 HaCaT细胞增殖的影响比色法。结果表明,在细胞生存能力没有显著差异在三组治疗后48小时内(图5 f)。因此,它被证实,迁移加速了湿润烧伤膏不是由于细胞增殖。此外,确认是否加速迁移的结果HaCaT细胞的分化、CK10和CK14 mRNA表达水平的每一组被RT-qPCR和蛋白表达水平的检测CK10和CK14检测到世行后48 h后治疗。没有显著变化的表达CK10和CK14 HaCaT细胞湿润烧伤膏组,另一组,这表明湿润烧伤膏对角质细胞的分化过程没有明显的影响(图5 g, H)。综上所述,我们得出的结论是,湿润烧伤膏加速愈合的促进角化细胞迁移。

由于胶原蛋白的生产和厚度与成纤维细胞的增殖和迁移,我们调查了湿润烧伤膏对MDF的影响。结果表明,湿润烧伤膏显著增强MDF的扩散和迁移能力,这可以部分解释湿润烧伤膏促进胶原重构的机制在糖尿病小鼠的伤口(图5 i, J)。

讨论

尽管许多研究表明湿润烧伤膏治疗烧伤的影响和慢性伤口(25- - - - - -27),其机制尚不清楚。在这项研究中,我们发现,湿润烧伤膏糖尿病大鼠显著促进伤口愈合。组织学结果显示胶原重构的再生皮肤湿润烧伤膏组高于糖尿病对照组。与此同时,毛囊和皮脂腺首次在伤口处形成湿润烧伤膏组,表明伤口湿润烧伤膏组的第一个完整的愈合过程。表皮增殖和分化标记如Ki67、CK10和CK14免疫荧光探测到验证了加速湿润烧伤膏对组织愈合的影响。此外,在体外结果表明,湿润烧伤膏对组织愈合的影响可能取决于角化细胞迁移的促进而不是增殖和分化,促进胶原蛋白再生,湿润烧伤膏可能与皮肤成纤维细胞的动员。综上所述,我们的研究结果证实湿润烧伤膏在促进糖尿病伤口愈合的作用,为临床应用提供新的理论基础diabetic-associated湿润烧伤膏治疗的慢性伤口。

由于糖尿病伤口的复杂性,临床治疗慢性糖尿病伤口往往需要多种方法的联合应用(28,29日)。近年来,一些新技术对于糖尿病患者的伤口已经逐步发展,如手术或干细胞移植,达到最好的效果(30.,31日)。然而,一些病人只能采取保守治疗由于其先进的年龄或多个潜在的疾病,导致可怜的治疗结果。因此,传统的治疗方案仍值得我们关注。中医在长期实践中,积累了许多丰富的和有效的方法来治疗慢性伤口(32,33)。

湿润烧伤膏是外部中药代理,这是很容易申请,无论大小、范围、和当地条件的伤口(27)。它是一个包含许多天然草药和植物油基软膏原料。它提供了生理所需水分伤口愈合和组织愈合。此外,它还具有防止皮肤脱水的药理作用,抗炎,抗菌,镇痛(34,35)。经过近30年的研究和临床应用,最初的湿润暴露疗法逐渐成熟和燃烧发展成皮肤再生医疗技术,已广泛应用于治疗慢性难治性伤口在身体表面。湿润烧伤膏不仅在中国广泛认可和使用,还介绍了在许多其他国家,如泰国、叙利亚、韩国、新加坡、阿拉伯联合酋长国等(36)。尽管许多临床应用已经证明了湿润烧伤膏涂于患处的积极效应和慢性伤口愈合,有一些基本的研究对湿润烧伤膏及其机制仍不清楚,这是阻碍其进一步临床推广的重要原因之一。

表皮是皮肤的最外层,表皮细胞和角化细胞是主要的。受伤发生在皮肤上时,角化细胞迁移到伤口面积,re-epithelializing受损组织和恢复表皮屏障(37,38)。然而,一小块没有治愈糖尿病伤口的重要特征是角质细胞的过度增殖和non-migration,导致连续增厚表皮伤口边缘,而伤口unhealing (39)。无疤痕胚胎的关键(40伤口愈合和再生潜力高完全愈合的动物的,如蝾螈,取决于快速愈合41)。此外,细胞外基质(ECM)成分的变化没有愈合的伤口和ECM降解率的增加,基质金属蛋白酶的增加可能造成的损害角质细胞的附着,导致异常的细胞信号和迁移障碍(42- - - - - -45)。因此,它是一种很有前途的治疗目标为糖尿病伤口改善角质细胞的迁移障碍促进伤口愈合(46)。在伤口愈合的过程中,组织再生比疤痕形成一个更理想的结果。虽然皮肤受伤后纤维化更常见,完整的皮肤再生导致完整的附件替换和函数。以前的研究(47)解释了新毛囊的再生活化Wnt信号全层损伤后的老鼠。表达毛囊干细胞种群分化标记建立了围绕这些毛囊再生,并成功地将自己通过毛发周期的所有阶段,并进一步形成相关的结构如皮脂腺。然而,引发皮肤附属物再生在哺乳动物中还没有完全理解。在这个研究中,我们证明了湿润烧伤膏可迅速改变胶原蛋白在皮肤再生,形成肉芽组织,和re-epithelialize伤口增强角质细胞的迁移能力,这可能是湿润烧伤膏促进伤口愈合的重要原因之一。同时,功能结构如毛囊和皮脂腺首先形成的再生皮肤湿润烧伤膏组的老鼠也伤口修复具有重要意义。

结论

总之,我们的研究进一步证明,湿润烧伤膏在糖尿病伤口愈合,发挥了积极作用,促进组织愈合能力可以促进伤口愈合的一个重要原因。结合之前的研究,我们认为,湿润烧伤膏可以加速胶原蛋白在皮肤再生的积累通过动员真皮成纤维细胞和促进角质细胞的迁移基于预防皮肤脱水,抗炎,抗菌,镇痛,最终导致伤口愈合。此外,愈合伤口有一个相对完整的皮肤附件。这一发现进一步加强我们的理解湿润烧伤膏在促进慢性伤口愈合的作用,提供了新的理论支持其进一步临床推广。

数据可用性声明

最初的贡献在这项研究中都包含在本文/补充材料,进一步的调查可以针对相应的作者。

道德声明

动物研究是审查和批准的动物保健和使用委员会右江民族医科大学,百色,中国(2021030103)。

作者的贡献

YG构思的项目,执行大部分的实验,写的手稿。YJ执行部分的实验,数据采集和数据分析。JH ZH型试剂准备和收集样本。QT设计研究实验和监督。所有作者阅读和批准最终的手稿。

资金

这项工作得到了国家自然科学基金(81774327,2020 zxyjh43, 2021 ky0541)(百科20204725和yy2021sk025)。上面的资金在这个项目的实施提供了融资。

确认

真诚地感谢谢静博士在他的指导下完成的手稿。

的利益冲突

作者声明,这项研究是在没有进行任何商业或财务关系可能被视为一个潜在的利益冲突。

出版商的注意

本文表达的所有索赔仅代表作者,不一定代表的附属组织,或出版商、编辑和审稿人。任何产品,可以评估在这篇文章中,或声称,可能是由其制造商,不保证或认可的出版商。

补充材料

本文的补充材料在网上可以找到:https://www.雷竞技rebatfrontiersin.org/articles/10.3389/fmed.2022.1042015/full补充材料

引用

1。卡P Petersohn我Salpea P, B Malanda Karuranga年代,安文N,等。2019年全球和地区糖尿病患病率估计和预测2030年和2045年:国际糖尿病联合会糖尿病阿特拉斯,结果9日版。糖尿病Res Pract。(2019)157:107843。doi: 10.1016 / j.diabres.2019.107843