第一次的报告Stephanostomum cesticillus1899年(1858年)等厕所,Merluccius Merluccius(林奈,1758)从第勒尼安海(意大利南部)
乔凡尼德Benedetto
1 __,
克劳迪奥·Gervasi
2 __,
克里斯蒂安Riolo
2,
杰西卡·玛丽亚Abbate
1,
塞布丽娜纳塔尔
2 *,大卫。Di Paola
2,
罗莎Falleti2和
卡梅隆Iaria
2
- 1墨西拿大学兽医学系,墨西拿,意大利
- 2部门的化学、生物、医药、环境科学、大学的墨西拿,意大利墨西拿
属Stephanostomum由digenean吸虫中发现许多海洋硬骨鱼。在这项研究中,Stephanostomum cesticillus(1858)等厕所,1899年欧洲鳕鱼(后期囊幼虫被确认Merluccius Merluccius在伊特鲁里亚海,林奈,1758)。后期囊幼虫被发现封装在肌肉,接近脊椎和鳃。的131个标本,111 (P = 84.7%,马米= 25.1 = 21.3)被digenean吸虫感染后期囊幼虫。形态学和组织学评估。这个属的成员的特点是双刺靠近口吸盘的冠冕。寄生虫的识别、分子分析通过28 s和18 s核糖体DNA (rDNA)基因。部分rDNA序列Stephanostomum高度匹配美国cesticillus类似比例的身份从爆炸的核苷酸数据库。目前的调查报告的存在美国cesticillus后期囊幼虫在m . merluccius第一次。我们的结果改善当前知识鳕鱼寄生虫为了更好地理解的分布美国cesticillus在m . merluccius在地中海和揭示寄生虫的生命周期添加其他可能的主机。
1介绍
欧洲鳕鱼(Merluccius Merluccius林奈,1758)是最重要的一个在西欧渔业和广泛的鱼类(凯西和Pereiro, 1995)和在地中海(奥利弗和Massuti, 1995)。捕鱼范围延伸从毛里塔尼亚到挪威西部海岸(21°N至62°N)和冰岛南部的(凯西和Pereiro, 1995),在不列颠群岛之间更广泛的和西班牙南部的(2011年冰)。m . merluccius主要是一个居于水底的硬骨鱼,发现在70年和370米深度,虽然可以从沿海水域捕获(30米)深水域(1000)(罗里斯Matallanas, 2003)。不同的股票在欧洲水域的存在是基于multi-methodological方法:东北大西洋和地中海的数量m . merluccius被认为是独立的股票(Mattiucci et al ., 2004;Cimmaruta et al ., 2005;米兰et al ., 2014)。此外,大西洋和地中海鳕鱼种群显示显著差异,如增长率、到期规模,招聘模式和产卵季节(森林和保利,2013)。这个物种是最重要的底栖物种在西欧。开始共同进化表明鱼类和它们的寄生虫是在动态平衡(Ferrer-Maza et al ., 2014),但寄生鱼类中经常被忽视的健康评估。几种鱼类寄生虫导致宿主的行为和形态变化,和一些寄生生物可能成为危险甚至致命的系统性感染鱼类和人类(摄影记者et al ., 2010;Hajipour et al ., 2022)。寄生虫也会影响群落结构和调节宿主种群动态(Marcogliese 2005)。Stephanostomum是一种digenean属吸虫属于家庭Acanthocolpidae和包括超过100种(Ngamniyom et al ., 2020),它的生命周期被认为是属于Acanthocolpidae模型研究所有属(布雷et al ., 2005)。内腹足类动物软体动物,第一中间宿主的寄生虫rediae阶段发展。第二中间宿主的特点是许多海水硬骨鱼,寄生虫的开发后期囊幼虫,主要在骨骼肌包绕的。确定主机大食鱼的硬骨鱼类的摄入第二中间宿主(后成为出没麦肯齐和运营,1975年;Køie 1978;布雷克里布疯狂,2003)。自2000年以来,Stephanostomumsp.后期囊幼虫也被发现在某些种类的双壳类软体动物(Perez-Urbiola Martinez-Diaz, 2001)。
许多研究报道从海洋和硬骨鱼类的微咸水的Stephanostomum例如,sp。Stephanostomum cloacum(斯利瓦斯塔瓦,1938)中发现的Triacanthus biaculeatus(布洛赫,1786)Stephanostomum bicoronatum(Stossich, 1883)中所描述的Sciaena阴影(Madhavi Shameem, 1993;布雷克里布疯狂,2003;布雷和雷蒙,2004)。在m . merlucciusdigenean吸虫感染,Aporocotyle spinosicanalis(威廉姆斯,1958),Hemiurus普通的,Hemipera magnaprostatica,Lecithochirium骶成人的胃标本被发现m . merluccius在地中海(Odhner 1905;厕所,1907;Gaevskaya Aleshkina, 1995)。有一个高的患病率(100%)Bucephaloides gracilenses大脑和脊髓神经的后期囊幼虫检索m . merluccius在爱尔兰海(北爱尔兰)(Crofton和橡皮擦,1954;约翰斯顿和哈尔顿,1981年)。
该研究报告的第一个发现Stephanostomum cesticillus感染m . merluccius来自南部第勒尼安海(粮农组织37.1.3)。识别的寄生虫进行通过28 s和18 s核糖体DNA测序。此外,组织学检查和表面识别是由扫描电子显微镜(SEM)。
2材料和方法
2.1鱼类和寄生虫抽样
在131年6月至2020年12月,鱼,在南方第勒尼安海(粮农组织37.1.3),被从西西里岛的渔业中心的实验鱼病理学(Centro di Ittiopatologia Sperimentale德拉西西里岛(cis))大学的墨西拿。生物指标体重(BW)和总长度(TL)对于每个标本,记录平均值+标准偏差(范围)的长度(MW)和体重(MW)计算,和鱼类性别被记录。流行病学指标感染的患病率(P %),平均丰度(mA),和平均强度(mI)是根据计算布什et al。(1997)。斯皮尔曼相关系数和卡方检验,分别评估生物特征数据之间的关系(体重和总长度)和性别的m . merluccius和美国cesticillus囊肿。重要性水平是p值< 0.05。统计分析使用GraphPad Prism 9.0版本软件(GraphPad软件、圣地亚哥、钙、美国)。
鱼最初接受外部检查评估任何外部损伤;后来进行了尸检。metacercarial囊肿被轻轻分开鱼肌肉使用立体显微镜下针和手术刀叶片(立体的发现。V12、蔡司、德国耶拿),然后打开。寄生虫都是澄清在甘油24 h,建议安装,然后确定键莎娃和布雷(2001)。囊肿在瓶采样和存储−80°C的分子分析。
2.2组织学分析
积极的组织样本包绕的后期囊幼虫在10%的缓冲福尔马林固定(Histoline、米兰、意大利),在自来水清洗,通过增加酒精脱水,二甲苯澄清,最后石蜡包埋。部分3-μm厚度得到切片机(EG11504徕卡生物系统,位于德国)。部分被苏木精和伊红染色())和光学显微镜下观察(徕卡DM6B)。
2.3扫描电镜
样品制备进行了描述Iaria et al。(2021)。短暂,五后期囊幼虫在增加酒精脱水的解决方案,根据临界点干燥法,和气急败坏的钯金层(20 nm±5%)与扫描电镜观察(EVO MA10,蔡司,耶拿,德国)。
2.4分子识别
样本清洗三次磷酸缓冲盐(PBS) 20分钟。总基因组DNA提取20后期囊幼虫囊肿使用向导SV基因组DNA净化系统(WI Promega,麦迪逊,美国)根据制造商的指示。随后,提取的DNA的浓度和纯度验证使用Implen Nanophotometer将军。使用GoTaq PCR进行®无色大师混合(WI Promega,麦迪逊,美国),配对四个不同的引物:28岁和18岁的年代。28 s DNA引物5′GTCCGATAGCGAACAAGTACCGT 3′和反向引物5′AGCATAGTTCACCATCTTTCGGGTCTCAA 3′(Mladineo et al ., 2010)被用来调查18 s DNA,底漆集吸虫c 5′ATGGCTCATTAAATCAGCTAT 3′和吸虫A-Rev 5′TGCTTTGAGCACTCAAATTTG 3′被使用,这是特定于吸虫吸虫物种之间由于更高的多态性(Routtu et al ., 2014)。28年代使用的PCR条件如下:最初在94°C变性30年代,紧随其后的是35周期30年代的变性在94°C,和退火30年代在58°C,伸长为60年代72°C,最后被设定为72°C扩展一步10分钟。18岁的循环条件是以下:变性在94°C 2分钟一次,变性在94°C 30年代,退火在56°C 30年代,60年代和72°C伸长重复30周期,紧随其后的是最后一个在72°C(伸长。样品的积极性是评估在1% (w / v)琼脂糖凝胶电泳。凝胶萃取进行了使用Promega工具包向导®SV凝胶和PCR清理系统,和样本测序Genechron生物技术(意大利罗马)在两个正向和反向方向使用相同的引物用于放大。由此产生的序列对齐使用ClustalW算法(https://www.genome.jp/tools-bin/clustalw使用核苷酸),分析了爆炸搜索(爆炸,http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/)对国家生物技术信息中心(NCBI;https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)来计算匹配的统计学意义。
3的结果
3.1验尸和组织学分析
验尸后,在111年的131年m . merluccius标本,2791包绕的传播digenean吸虫后期囊幼虫在肌肉组织中发现,靠近脊椎和鳃(P = 84.7%, mI = 25.1±26.54,马= 21.3±25.54)(图1 a, B)。所有检查鱼的平均长度30.7±4.7厘米(17.5 - -49.0厘米)和平均体重为287.6±136.3克(87.0 -925.0克)。此外,36.6%是男性,63.4%的女性。
图1Metacercarial囊肿的Stephanostomum cesticillus在不同的组织和器官:(一)冠囊肿腮下面;(B)囊肿在肌肉;(C)后期囊幼虫心里包绕的。
没有统计上显著的差异美国cesticillusmetacercarial丰度和生物统计数据,包括体重(r= 0.0099;p = 0.9107),总长度(r = 0.0951;性别(p = 0.2801),χ2df = 1.691: 1;p = 0.1934)m . merluccius在目前的调查,调查被观察到。
五个标本的131个(3.8%)呈阳性被囊的后期囊幼虫心(图1 c)。组织学分析显示存在的包绕的后期囊幼虫在肌肉组织中,由结缔组织封装表中的主机肌肉组织(图2)。
图2组织学的证据Stephanostomum cesticillus后期囊幼虫;(一)美国cesticillusmetacerciae包绕的肌肉组织(箭头);(B)高放大倍数的包绕的美国cesticillusmetacercaria(箭头所指)。
3.2形态评价
研究了球形囊肿130µm在大小和颜色发白的。Diaphonised囊肿表明,寄生虫的尸体被一堵厚实的囊肿内弯曲。形态metacercarial头地区的评估显示,双皇冠的刺,由大约34刺口吸盘。整个寄生虫的身体布满了小杆状刺(图3 a, B)。腹吸盘大于口吸盘和局部身体的中间。由于早期metacercaria和囊肿大小,没有其他形态特征被diaphonisation高亮显示(图4)。形态特征,而钥匙,允许我们识别检索寄生虫属的一员Stephanostomum。由于这个原因,也为了更好地描述这种寄生虫种类,分子进行评估。
图3扫描电子显微镜的Stephanostomum cesticillusmetacercaria:(一)circum-oral刺(箭头);(B)小杆状刺metacercarial体表(圆)。
图4Stephanostomum cesticillusmetacercaria甘油diaphonisation之后。口吸盘(箭头);腹吸盘(箭头所指)。
3.3分子分析
核苷酸序列的扩增子(792和844个基点18 s rDNA和28 s rDNA分别)从引物组都获得相同的生物复制。爆炸(NCBI)序列分析显示100%的相似性美国cesticillus,两个18 s rDNA和28 s rDNA分别标记(DQ248214.1和DQ248227.1), E值为0.0,和查询的100%。代表的DNA序列为小型和大型单元核糖体RNA基因提交基因库(分别加入数字OQ283820和OQ283821)。
4讨论和结论
吸虫后期囊幼虫记录持续在许多沿海鱼类原产于地中海;几个作者报道的存在Stephanostomum种虫害感染各种器官和组织的红鲻鱼(Mullus surmuletus,林奈,1758)在中央地中海(Bottari et al ., 2020)和其他硬骨鱼类的物种的西方地中海(莎娃和布雷,2001)。其中,Stephanostomum kovalevae安康鱼(Lophius vomerinus肠,瓦朗谢讷,1837),Stephanostomum murielae在bumpnose鲹(Carangoides hedlandensis消化道,惠特利,1934)Stephanostomum在orange-spotted sp.鲹(Carangoides bajad)体腔被报道(布雷和雷蒙,2004;Al-Zubaidy 2011;布雷和贾斯汀,2011)。此外,包绕的发病率相当高Stephanostomum baccatum(Nicoll, 1907)Stephanostomum举止(林顿,1898)后期囊幼虫已经报道的鳍,皮肤,肌肉,鱼类的鳃、心包,脾(吉布森1984年)。的发病率数据报告确认高影响这种寄生虫在野生水底的硬骨鱼。高亮显示的形态特征,如大小、数量的刺,身体表面分析认为后期囊幼虫属的一个成员Stephanostomum后,特征描述莎娃和布雷(2001)。确定吸虫是很困难的,当只使用形态学由于早期发展阶段或样本时发现在宿主组织。因此,我们进行了分子识别与一个工具,有选择地放大只有吸虫DNA,同时对吸虫是普遍的,能够区分吸虫的物种。选择性PCR引物组18 s rDNA能区分不同的吸虫。所选的寡核苷酸引物组c和A-rev放大一个序列允许物种分为明显的集群。许多作者显示形态并不总是可靠指标的物种差异;形态相似的吸虫基因可能是多样化(布雷克里布疯狂,2003;Routtu et al ., 2014)。我们可以得出结论,PCR扩增和直接测序的18岁和28 s核糖体DNA (rDNA)产品允许正确分类任务。
在这项研究中,我们将描述美国cesticillus感染m . merluccius来自地中海地区。寄生虫感染评估鱼在几项研究中扮演着重要角色。此外,评估是重要的进一步收集信息在中间和最终宿主,改善当前的知识开始相互作用和吸虫寄生疾病传播。寄生虫种群之间的差异在不同的地理区域是一个至关重要的因素在股票评估和演示和彻底调查了几个作者(Espinola-Novelo奥利瓦,2021年)。
这里的数据报告上添加信息使用的可能性美国cesticillus作为一个生物标记,因为它从未被描述在地中海鳕鱼;因此,这些寄生虫的报道可以添加这条鱼物种的分布信息。虽然生物指数之间的正相关和寄生虫大量报道在淡水和海水鱼(波林面前,2005年;克鲁斯和亚历山大,2013;Lisnerova et al ., 2022),在我们的研究中,没有观察到的相关性,证实均匀分布和完美的相互作用美国cesticillus和m . merluccius。此外,作为临时的一些研究报告,数据支持和提高疾病传播知识,这些寄生虫的流行。这项研究代表的第一次报告美国cesticillus感染肌肉组织的地中海鳕鱼。尽管报告的高患病率,这种寄生虫的物种,即使非常类似于其他digenean吸虫,被认为是人畜共患的代理(例如,Heterophyidae和Diplostomidae),并不以人畜共患的潜力,不代表人类的风险。
数据可用性声明
提出了原始的贡献研究公开。这些数据可以在这里找到:NCBI数据库https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/加入数字OQ283820——OQ283821。
作者的贡献
范本:CG和GB。数据管理:SN和KR。形式分析:GB, SN和射频。资金收购:CI。调查:CG、GB和SN。方法:是的,射频,基米-雷克南和DP。监督:CI。角色/原创作品草案:CG、GB和CI。Writing-review和编辑:GB和CI。所有作者的文章和批准提交的版本。
资金
研究基金提供的阿宝FEAMP 2.56 2014 - 2020年净鱼路径,批准号G47B18000130009项目代码生01 /女士/ 18。
的利益冲突
作者声明,这项研究是在没有进行任何商业或财务关系可能被视为一个潜在的利益冲突。
出版商的注意
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关键词:寄生虫,Acanthocolpidae,吸虫、地中海、欧洲鳕鱼,Stephanostomum cesticillus
引用:De Benedetto G Gervasi C, Riolo K, Abbate JM,前者纳塔尔年代,Di Paola D, Falleti R和Iaria C(2023)的第一份报告Stephanostomum cesticillus1899年(1858年)等厕所,Merluccius Merluccius(林奈,1758)从第勒尼安海(意大利南部)。前面。3月科学。10:1178977。doi: 10.3389 / fmars.2023.1178977
收到:2023年3月3日;接受:2023年5月02;
发表:2023年5月22日。
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佩德罗极其美国佛罗里达国际大学版权©2023 De Benedetto Gervasi、Riolo Abbate,前者纳塔尔,Di Paola Falleti Iaria。这是一个开放分布式根据文章知识共享归属许可(CC)。使用、分发或复制在其他论坛是允许的,提供了原始作者(年代)和著作权人(s)认为,最初发表在这个期刊引用,按照公认的学术实践。没有使用、分发或复制是不符合这些条件的允许。
*通信:塞布丽娜纳塔尔,snatale@unime.it
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