内生真菌的抗氧化活性的菌丝methanolic提取BvFV和BvFIX孤立的叶子紫荆花variegata

1介绍

皮肤是人体最大的器官,它的主要功能是保护其他器官(尼科尔斯Katiyar, 2010;Panich et al ., 2016),它的细胞外基质(ECM),与所有的组件在理想的数量,让皮肤功能充分实现。这种保护作用是减少皮肤老化,一个普通的过程包括遗传和环境因素(Panich et al ., 2016),分为内在和外在老化。外在老化与吸烟、饮酒、营养、污染、辐射和紫外线(UV) (黄et al ., 2014;莫拉韦尔塔et al ., 2016)。流行病学、临床和实验研究表明,紫外线辐射引起损伤真皮结缔组织和相关各种皮肤状况的发展,导致过早衰老,称为光老化和皮肤癌(尼科尔斯Katiyar, 2010;黄et al ., 2013;Briganti et al ., 2014;黄et al ., 2014;金正日,2016;莫拉韦尔塔et al ., 2016;Panich et al ., 2016)。紫外线辐射会导致皮肤损伤的直接和间接影响。紫外线辐射的直接影响DNA发生在核酸吸收UVB,导致一个核苷酸的结构重排。相关的间接影响组织的生产活性氧(ROS) (尼科尔斯Katiyar, 2010;金正日,2016;Panich et al ., 2016)。

皮肤修复氧化损伤机制,抗氧化途径(Panich et al ., 2016),由酶和non-enzymatic系统工作来维持细胞内ROS的最佳水平。基本酶抗氧化剂的例子有超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)及谷胱甘肽还原酶(GR)和non-enzymatic中抗坏血酸盐,谷胱甘肽(GSH)和α-tocopherol (尼科尔斯Katiyar, 2010;Raut et al ., 2012;Moukette et al ., 2015;Panich et al ., 2016;金正日,2016)。然而,过度暴露于紫外线辐射超过身体的抗氧化防御能力,导致损伤脂质,蛋白质,和DNA,可以传播到子细胞,导致光老化甚至皮肤癌(尼科尔斯Katiyar, 2010;Briganti et al ., 2014;Panich et al ., 2016;金正日,2016)。高水平的氧化应激也会导致脂质过氧化反应,形成丙二醛(MDA)等产品。MDA结合活性氧导致更多的细胞损伤与细胞组件交互,包括DNA,造成基因毒性(潘普洛纳,2008年;Das et al ., 2015)。防止氧化体内的第一步是消除超氧化物自由基(O₂·^{- - - - - -}),由SOD一步,把O₂·^{- - - - - -}在H₂O₂(Panich et al ., 2016;Zhang et al ., 2016)。控制的SOD活性及其表达水平有助于SOD可用的数量,因此,ROS水平(苗族和圣,2009年;佩雷斯et al ., 2009;Panich et al ., 2016)。后SOD活性、过氧化氢酶和GPx转换H₂O₂格式化为H₂O (Anjum et al ., 2016;Zhang et al ., 2016)。在光老化,有较低的过氧化氢酶活性以来反复接触UVB抑制SOD的活性和过氧化氢酶(尼科尔斯Katiyar, 2010;金正日,2016)。脂质过氧化作用诱发快速和显著的细胞内谷胱甘肽的耗竭。一旦耗尽谷胱甘肽,细胞表现出一个细胞内氧化还原状态的变化和传播氧化应激反应,其次是生产和氧化谷胱甘肽的转换回谷胱甘肽GR。因此,该系统参与谷胱甘肽合成和恢复是至关重要的维持细胞的氧化还原平衡(潘普洛纳,2008年;Anjum et al ., 2016)。

PPAR家族表达在皮肤上在不同的细胞类型,他们发现在三个亚型,PPARαPPARβ/δ,PPARγ(Di-Poi et al ., 2004;全et al ., 2015)。PPARβ/δ是最常见的在成纤维细胞同种型,因此,在皮肤上,防止退化,这已被证明对碘氧基苯甲醚的I型和III胶原蛋白和分泌基质金属蛋白酶1型(可以),胶原蛋白的主要酶降解,通过抑制UVB-induced ROS的生成在真皮成纤维细胞(荣格et al ., 2015)。

许多植物化学物质已经被调查,并演示了对皮肤光保护活动。多酚是最有前途的,因为他们有免疫调节、抗炎和抗氧化活性(尼科尔斯Katiyar, 2010;Das et al ., 2015)。此外,他们可以吸收整个波长谱UVB辐射和UVA频谱的一部分(尼科尔斯Katiyar, 2010;Lecci et al ., 2021)。因此,多酚类物质可以作为防晒,除了化学预防,减少炎症,氧化应激,有害影响紫外线辐射对皮肤造成的DNA (尼科尔斯Katiyar, 2010)。

植物内生微生物栖息在植物组织在它们的生命周期或部分不会导致他们伤害(谭和邹,2001;瓦et al ., 2012;太阳et al ., 2016)。他们被称为潜在来源的天然化合物被证明有多种生物活性,如抗癌、抗菌、抗氧化,这使得它们的药理学的兴趣(Artanti et al ., 2011;刘et al ., 2016)。寻找内生真菌产生的次生代谢物正变得越来越重要,因为它提供了另一种策略来减轻植物种群增长的影响所需的药品的生产,以及对生物多样性和生态系统保护(谭和邹,2001;太阳et al ., 2016)。紫荆花variegata是一种植物具有抗氧化和抗糖尿病的活动,最新的研究认为这些活动多酚和类黄酮(法拉克et al ., 2015)。内生菌生产主机化合物的能力使植物内生真菌中提取的b . variegata成为一个重要而有趣的化合物的来源,这可能会成长为一个新的方法来预防光老化(谭和邹,2001;周et al ., 2010)。

2材料和方法

2.1真菌浸没液体培养

两株内生真菌以前从叶子中分离出来的紫荆花variegata被选为这个研究。真菌基因序列的识别沉积在基因库BvFV (OP604490)和BvFIX (OP604493) (Mesquita PG、数据提交出版)。五偏Sabouraud葡萄糖琼脂(Himedia)每个真菌以前培养7天30°C。菌丝和孢子是从表面的偏用人的白金圈和转移到50毫升pre-fermentation介质被杰克逊et al。(杰克逊et al ., 1993)和孵化30°C和150 rpm。48小时后,这些pre-cultures被转移到一个锥与先前描述的1000毫升的发酵培养基(杰克逊et al ., 199372 h),并保存在相同的条件。

2.2原油提取生产

72 h培养真菌后,产生的培养基在真空过滤。菌丝的重,转移到烧瓶包含500毫升的甲醇,就一直躺在浸渍7天保证真菌的死亡。这之后,浸渍在绘画纸1级过滤滤纸在真空下,与甲醇在旋转蒸发器蒸发(Heidolph Laborota 4010 -数字)在40°C下真空获得methanolic原油提取。

2.3原油提取分离

methanolic原油提取生产中可溶性hydroalcoholic解决方案(10毫升的甲醇和30毫升蒸馏水)和液-液分馏的分区与乙酸乙酯和正己烷。乙酸乙酯和正己烷分数在旋转蒸发器干40°C下真空和hydroalcoholic分数被冻干干燥(Liobras, Liofilizador L108)。这个分数是计价methanolic分数。分数是称重和溶解在1毫升的甲醇。

2.4总多酚含量的测定

分数的提取物的总多酚含量是由Folin-Ciocalteu试验(Georgetti用餐et al ., 2006一些修改)。简单地说,100年µL样本与1.9毫升的水混合,250µL Folin-Ciocalteu (Sigma-Aldrich)试剂,和250年µL 10%碳酸钠溶液。没食子酸作为标准,和总多酚含量的样本表示为没食子酸当量每毫克的提取(坚毅不屈/毫克)。

2.5总类黄酮含量测定

总类黄酮含量是决定使用铝氯测定(Georgetti用餐et al ., 2006一些修改)。短暂,100µL提取的解决方案是混合1.9毫升的甲醇和500µL 5%氯化铝溶液。反应混合物在室温下均质在涡和孵化为30分钟,在425 nm和吸光度测定分光光度计UV / VIS(日本岛津公司06786)。槲皮素标准,结果表示为槲皮素相当于每毫克的提取(EQ /毫克)。

2.6抗氧化活性测定DPPH·化验

使用激进的抗氧化活性测定2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH·)游离基清除剂试验(蒋介石et al ., 2012)。槲皮素作为标准,结果DPPH·的比例削减与控制相比,考虑到负面的吸光度控制100%。的集成电路₅₀值确定使用八个不同浓度的提取。剂量与反应曲线,以及集成电路₅₀价值决定GraphPad棱镜5 (GraphPad软件,Inc .)软件。

2.7评估的脂质过氧化作用

亚油酸的方法被用来评估脂质过氧化的抑制(Laokuldilok et al ., 2011)。短暂,亚油酸与渐变20然后乳化溶解在0.1 mol / L磷酸盐缓冲剂pH值7,100µL真菌提取物被添加。这个反应是孵化8 h在37°C,免受光。孵化后,100年µL乳液的可溶性1毫升的甲醇和3毫升的60%甲醇溶液。分光光度法测得的吸光度是在234 nm,共轭二烯过氧化物的最大吸光度,亚油酸氧化的产物,发生。生育酚在100µg / mL被用作标准,和抑制脂质过氧化的百分比计算(如前所述)(Laokuldilok et al ., 2011)。

2.8治疗的细胞脂质过氧化,超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽减少化验

成纤维细胞在镀3 x 10⁵细胞/在杜尔贝科6-well板的修改鹰介质(DMEM,西格玛奥德里奇)含10%胎牛血清(的边后卫,Gibco)和100 U /毫升青霉素和链霉素100毫克/毫升、并与真菌提取物浓度的解决方案添加25µg / mL, 50µg / mL, 100µg /毫升,或使用的溶剂来溶解提取。盘子被孵化48 h在37°C和5%股份有限公司₂。接下来,细胞治疗300µM H₂O₂1 h,然后,治疗被和细胞孵化DMEM培养基在相同条件下上述48 h。

细胞被收集在磷酸盐(PBS)和离心机在4000 rpm 5分钟在4°C。颗粒resuspended在冰水和受到3冰冻和解冻周期获得细胞溶解产物。量化细胞溶解产物蛋白都使用了洛瑞的方法(洛瑞et al ., 1951)使用标准的牛血清白蛋白(Sigma-Aldrich)。

2.9通过MTT测定纤维母细胞和海拉的异常评价

根据的方法提取的细胞毒性评估3 - (4 5-dimethyl-2-yl) 2, 5-diphenyl溴化四唑(MTT) (Mosmann 1983)。简单地说,1 x10⁴细胞(成纤维细胞或海拉)在96孔板,镀真菌提取物处理解决方案6.25µg / mL, 12.5µg / mL, 25µg /毫升,50µg /毫升和100µg /毫升浓度和培养48 h(成纤维细胞)或24 h(海拉)5%股份的氛围₂,95%的湿度在37°C。

2.10瞬时转染和治疗

在海拉细胞使用Lipofectamine执行瞬时转染^®2000(英杰公司)来评估PPARγ受体激动剂活性的提取物,PPARα和PPARβ/δ受体。50.000细胞转染前的一天,被播种在48-well板块中自由的抗生素。嵌合质粒都使用一个PPAR同种型和荧光素酶报告质粒由GAL4响应要素(Gal-Luc)。细胞治疗与不同的真菌提取物或10⁷(积极控制PPARγ)mol / L罗格列酮,10⁴mol / L苯扎贝特(积极控制PPARα)10³mol / L苯扎贝特(积极控制PPARβ/δ),或车辆用于样品制备(负控制),被转染和孵化后6 h 22 h。

这一时期后,介质被移除,100µL裂解缓冲,100 x 100更易与L三羟甲基氨基甲烷/特里同液pH值7.6,被添加到每个。然后,10µL细胞溶解产物被转移到一个超小型电子管,和20µL荧光素添加到它的荧光素酶氧化反应,在光度计测量(Promega Glomax 20/20光度计)。

2.10.1 PPARγ净化,PPARα和PPARβ/δ质粒

获得纯化的质粒转染试验中使用进行了使用Max预科Qiagem -技巧方法。质粒的纯度和浓度测定光密度在260 nm和280 nm NanoDrop分光光度计(热科学2000)。

2.11评估细胞的脂质过氧化作用

细胞溶解产物的脂质过氧化作用是评估使用硫代巴比土酸(稍后通知,Exodo Cientifica)试验(Ohkawa et al ., 1979)。硫代巴比土acid-reactant物质(TBARS)测定fluorometrically的激发波长520 nm和发射波长550 nm的荧光光谱仪(贝克曼库尔特,DTX 800多模探测器)。MDA (Sigma-Aldrich)被用来构造一个标准曲线,和细胞溶解产物是提交给一个蛋白质定量测定(洛瑞et al ., 1951)规范化获得的结果,它被表示为nmol MDA每毫克的蛋白质。

2.12评价超氧化物歧化酶活性

SOD活性在细胞溶解产物测定SOD清除,使用黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶生化方法(Weydert卡伦,2010)作为SOD生成器和抑制减少氮蓝四唑作为活动指示器。细胞溶解产物样本添加到50 700µL更易与L磷酸钾缓冲pH值7.8,包含100µmol / L EDTA, 60µmol / L电视台,100µmol / L黄嘌呤。最终的反应体积完成950µL 50更易与L磷酸钾缓冲pH值7.8,包含100µmol / L EDTA。黄嘌呤氧化酶(0.075 U /毫升)被添加到样本,然后吸光度测定的分光光度计在动态模式下5分钟的波长560 nm。细胞溶解产物蛋白量化使用洛瑞的方法(洛瑞et al ., 1951)获得的结果正常化。

2.13过氧化氢酶活动的评价

过氧化氢酶活性取决于监测H的分解率₂O₂spectrophotometrically波长240 nm,根据Aebi描述的方法,1984Aebi 1984)。细胞溶解产物样品(50μL)被添加到300年30μL更易与L H₂O₂解决方案在100年更易与L磷酸钠缓冲区,pH值7,650μL相同的缓冲区。的反应是监控135秒240海里的动力学模式。的摩尔消光系数39.4更易/ L。厘米是用于H₂O₂,结果被表示为一个百分比的猫的单位每毫克的蛋白质,考虑到猫活动有细胞的100%。一个单位的分解所需的酶量被定义为1更易与H₂O₂每分钟在反应条件。细胞溶解产物蛋白量化使用洛瑞的方法(洛瑞et al ., 1951)获得的结果正常化。

2.14评价减少谷胱甘肽

测定谷胱甘肽是由的方法Hissin和自己(1976)一些修改。简单地说,每毫升细胞溶解产物,200µL 30%三氯乙酸溶液是补充道。悬浮液在4000 rpm离心机在4°C 6分钟,然后是浮在表面的收集和离心机在4°C 10000 rpm 10分钟。当时上层清液用于谷胱甘肽的决心。细胞溶解产物蛋白量化使用洛瑞的方法(洛瑞et al ., 1951)获得的结果正常化。

2.15统计分析

统计分析与GraphPad棱镜5。数据表示为平均值±标准平均误差(S.E.M.)。化验都是独立完成至少3次。结果统计评估使用方差分析单向或双向方差分析Dunnett紧随其后的测试,Bonferroni或土耳其的多重比较测试。数据被认为是统计学意义,p < 0.05。

3的结果

在这项研究中,两株内生真菌的菌丝体提取之前从叶子中分离出来的紫荆花variegata收集在巴西利亚,巴西,BvFV BvFIX,尽可能的为他们的抗氧化活性进行了评估皮肤保护者对抗氧化应激。

3.1确定的总多酚和类黄酮含量和抗氧化活性提取物的分数

产生内生真菌的提取物后,这项工作的第一步是量化的茶多酚和黄酮类物质的内容,因为它们是次生代谢产物的抗氧化能力。总多酚、总类黄酮提取的分数,及其抗氧化活性所示图1。正如预期的那样,最无极的提取物,hexanic提取、显示最低的抗氧化活性和多酚和类黄酮含量最低。乙酸乙酯分数显示多酚和类黄酮含量最高,methanolic分数显示最高的抗氧化活性。结果表明methanolic提取物中多酚化合物黄酮类化合物。这两个分数的原油真菌的菌丝体提取物,methanolic和乙酸乙酯,表明多酚和抗氧化剂的结果感兴趣的活动,让他们继续评估其他化验。然而,methanolic提取物显示出更好的生产产量。对于这个工作,methanolic分数的原油提取真菌菌丝选择继续实验,和下面的结果引用这些分数,名叫以后methanolic提取物。

3.2抗氧化活性评价- IC的决心₅₀

提取物的抗氧化活性分数使他们成为优秀的候选人评估其可能的保护行动细胞暴露于氧化应激。methanolic提取物的抗氧化活性是由DPPH·的清除剂化验和表达为IC₅₀必要的提取浓度减少50%的DPPH·自由基。结果所示图2;真菌的提取BvFIX显示最低的IC₅₀值(12.09毫克/毫升)中两个真菌提取物。

3.3确定真菌中提取的细胞毒性效应

知道提取物有抗氧化活性,MTT试验进行确定真菌中提取的细胞毒性效应和浓度,可用于治疗人类皮肤成纤维细胞评估过氧化氢酶、SOD,脂质过氧化反应,以及转染化验海拉。获得的结果所示图3。根据iso - 10993 - 5 - 2009 (国际标准化组织,2009年),提取有细胞毒性的潜在如果生存能力是减少到少于70%的空白。因此,所有的提取物对人体皮肤成纤维细胞有毒害作用或海拉细胞浓度测试。

3.4评价脂质过氧化的抑制作用

ROS产生紫外线照射后会导致脂质过氧化作用,因此,为了进一步研究提取物的抗氧化活性,在这个工作,两个化验进行评估脂质过氧化作用。第一个旨在评估亚油酸自动氧化的抑制作用。Methanolic提取真菌表现出抑制脂质过氧化活性(图4)。亚油酸分析是用来确定脂质过氧化的抑制,和α-tocopherol 100µg /毫升浓度作为标准。Methanolic提取100µg /毫升的BvFV显示抑制脂质过氧化能力高于α-tocopherol在同一浓度。另一方面,methanolic提取BvFIX显示较低的抗氧化活性的测定条件。

3.5评价受体激动剂活性PPARγ,PPARα和PPARβ/δ受体

评价γ激动剂活性的提取物,β/δ,α受体亚型的PPAR进行评估其可能作为chemoprotective代理人施加在皮肤上的活动通过PPAR受体的激活。结果,所示图5显示,提取并没有显示在PPARαPPARγ受体激动剂活性,但BvFV提取100µg /毫升略PPARβ/δ受体激活。提取BvFIX在同一浓度(100µg /毫升)显示PPARβ/δ受体的激活率明显低于观察到的车辆。

3.6评价细胞的脂质过氧化作用

如前所述,两个化验进行本研究评估脂质过氧化抑制。真菌提取物抑制脂质过氧化的能力在成纤维细胞后评估氧化应激诱导的细胞治疗H₂O₂。结果(图6)显示的methanolic分数BvFV提取物抑制脂质过氧化反应,所以MDA浓度仍类似于细胞,发现没有报氧化应激。这个结果表明BvFV methanolic分数的提取可以防止成纤维细胞氧化应激引起的脂质过氧化反应,确认结果中观察到另外两个化验,DPPH,提取有很高的抗氧化能力,使用亚油酸和抑制脂质过氧化作用,其抑制能力的积极控制α-tocopherol类似。

Methanolic一部分BvFIX抑制脂质过氧化,减少MDA浓度约60%相比,细胞只提交治疗H₂O₂。在这种情况下,给出的结果也是有前途的,因为尽管发现浓度高于平均发现成纤维细胞不受氧化应激,BvFIX的提取能够保护细胞免受脂质过氧化反应,因为它大大减少MDA的浓度。这个结果也符合那些因DPPH实验所得,在提取显示良好的抗氧化活性,在抑制亚油酸脂质过氧化作用的试验,它显示抑制脂质过氧化的能力。

3.7评价超氧化物歧化酶活性

超氧化物歧化酶是皮肤对ROS的第一道防线。因此,包含更多的提取物的抗氧化活动,SOD活性评估通过测量抑制减少氮蓝四唑(电视台)。结果表示为一个百分比的SOD活性细胞治疗控制相比,考虑100%的SOD活性控制细胞并不强调与H₂O₂。

人类皮肤成纤维细胞的治疗与H₂O₂SOD活性下降到38.84%±10.05%,治疗BvFV真菌提取物100µg /毫升浓度是设法提高SOD活性63.99%±9.75%。BvFIX真菌的提取SOD活性增加,在剂量依赖性的方式,增加49.62%±7.87%,56.64%±12.27%和240.46%±26.11%,25µg /毫升浓度,50µg /毫升和100µg /毫升,分别为(图6)。

3.8过氧化氢酶活动的评价

过氧化氢酶是人体抗氧化系统另一个关键酶。过氧化氢酶活性是由spectrophotometrically监测H₂O₂分解的波长240 nm。结果表示为一个百分比的过氧化氢酶的活动,有100%不活动归因于控制细胞诱导氧化应激与H₂O₂。

人类皮肤成纤维细胞的治疗与H₂O₂过氧化氢酶活性下降到73.26%±9.18%。相比之下,methanolic治疗真菌的提取BvFV 25µg /毫升的浓度,50µg /毫升和100µg /毫升,分别在64.71%±8.23%,87.26%±8.44%和76.22%±6.33%的过氧化氢酶活性相比,控制。Methanolic提取的菌丝BvFIX造成浓度的过氧化氢酶活性的增加25µg /毫升和50µg /毫升,展示活动148.41%±2.39%和140.71%±8.28%,分别。在100µg /毫升浓度,活动减少到38.24%±9.51%。图中图6代表这些结果。

3.9评价的谷胱甘肽水平降低

谷胱甘肽水平降低代表检查细胞的氧化还原状态的一种方法。人类皮肤成纤维细胞的治疗与BvFV methanolic提取100µg /毫升的浓度谷胱甘肽的浓度增加了72.53±5.80%控制相比,而治疗methanolic提取物BvFIX 25µg /毫升的浓度,50µg /毫升和100年µg /毫升它能够增加38.83±4.79%;21.06±3.59%和39.38±4.76%的谷胱甘肽水平降低细胞(图6)。

4讨论

衰老是一个自然的过程,发生在所有的动物物种。它会导致许多有害的变化,增加的可能性正在退化的过程(潘普洛纳,2008年)。皮肤老化是一个复杂的生物过程,通过内在和外在因素的诱导,由于时间的流逝或环境因素的作用,如辐射、紫外线辐射(主要蒋介石et al ., 2012;黄et al ., 2014;荣格et al ., 2015;莫拉韦尔塔et al ., 2016;Panich et al ., 2016)。寻找免疫调节、抗炎和抗氧化机制构成光保护策略。许多抗氧化剂代理是植物化学的衍生品,茶多酚的主要代谢物研究之一,因为他们有这些功能(Nadim et al ., 2014;博世et al ., 2015)。

原油methanolic提取两种内生真菌的研究能够产生的多酚类化合物。中的多酚含量的提取评价这项研究也高于的提取白兰叶子(2.7±0.2µg坚毅不屈/毫克),它有保护活动在人类皮肤成纤维细胞暴露于紫外线辐射衰减金属蛋白酶- 1的表达,MMP-3 MMP-9促进恢复胶原蛋白合成的(蒋介石et al ., 2012)。

在这个工作,两个化验进行评估脂质过氧化作用。第一个旨在评估亚油酸自动氧化的抑制作用。结果(图4)显示的methanolic分数BvFV粗提取液,在12.5µg /毫升的浓度和50µg / mL,显示类似α-tocopherol活动,积极控制在100µg /毫升的浓度,使用同样的浓度(100µg /毫升)的提取79.50±6.50%高于α-tocopherol BvFV显示活动。DPPH·化验分析可以观察到这种提取物表现出较高的抗氧化活性。细胞内脂质过氧化化验证实BvFV提取物的抗氧化活性以来的MDA浓度成纤维细胞治疗与H进行提取和强调₂O₂在统计学上类似于细胞内MDA和H没有压力吗₂O₂(图6)。BvFIX提取的,三个浓度测试能够降低MDA的浓度超过50%相比,细胞只提交治疗H₂O₂(图6),表明它也带来了有前景的结果是一种抗氧化剂。

当与文献相比,可以看出提取都是有前途的脂质过氧化反应的抑制自50µg /毫升hydroalcoholic从树皮中提取生产的干的Saraca籼,抗氧化活性和减少细胞毒性和基因毒性的能力与x射线辐照引起的,能够减少MDA浓度x射线照射后1、5倍(Das et al ., 2015),methanolic提取BvFV同时BvFIX MDA浓度减少了大约4和2.5倍,分别经过诱导的氧化应激。佩雷斯的研究et al ., 2009年,表明缺乏sod1基因小鼠的寿命减少与野生型小鼠相比。作者观察到水平的氧化损伤sod1的观察^{- / -}老鼠远远高于普遍观察到的组织老老鼠(佩雷斯et al ., 2009)。

这项工作的结果表明BvFV提取SOD活性增加。BvFIX提取增加SOD活性,而在细胞酶活性存在剂量依赖的相关性并不接受氧化应激(图6)。当比较结果与50µg /毫升hydroalcoholic从树皮中提取生产Saraca籼能提高SOD活性的1.3倍后暴露在x射线(Das et al ., 2015),BvFIX代谢产物可以被认为是有前途的减少皮肤过早老化,自BvFIX methanolic分数在相同浓度提取SOD活性增加了3.6倍后诱导的氧化应激。H₂O₂由SOD活性由过氧化氢酶分解成水和氧气(佩雷斯et al ., 2009;金正日,2016)。BvFIX提取methanolic分数的过氧化氢酶活性增加,甚至在细胞不发生氧化应激(图6)。

ROS产生紫外线照射后会导致快速和显著的细胞内谷胱甘肽的耗竭。因此,合成所涉及的系统和恢复谷胱甘肽是必要的来维持细胞的氧化还原平衡(潘普洛纳,2008年;Zapatero-Solana et al ., 2014)。在这个工作中,谷胱甘肽是量化,methanolic提取谷胱甘肽的浓度增加的分数成纤维细胞在受到氧化应激(图6)。与VC-3LG相比,AsA导数,强化了细胞内的抗氧化系统,它可以观察到,它能够增加谷胱甘肽的浓度大约25%和50%在人类表皮的角质细胞不受氧化应激在3µM和10µM,浓度分别为(福et al ., 2016)。因此,BvFV和BvFIX真菌提取物也可以承诺的能力加强细胞内抗氧化系统。

抗氧化酶可能表达增加了PPARs操作(Briganti et al ., 2014;Shin et al ., 2016)。在这项研究中,兴奋剂活动PPARαmethanolic分数的提取物,PPARβ/δ,PPARγ受体被评估。结果表明,BvFV提取100μg /毫升浓度略激活PPARβ/δ受体(图5)。总之,这项工作的结果表明BvFV methanolic分数和BvFIX菌丝提取物抗氧化活性和能力提高的主要抗氧化酶的活性真皮,即使与过氧化氧诱导的氧化应激,暗示他们的应用程序的化学预防皮肤老化。真菌菌丝的浸渍在甲醇七天被选为代谢产物的萃取方法,确保真菌的死亡。必须进行新的提取条件优化萃取过程和评估代谢物提取的成分和活动。同时,应该进行进一步的研究来证实和调查这些提取的活动防止光老化。

数据可用性声明

原始数据支持了本文的结论将由作者提供。

作者的贡献

DF进行实验,分析数据,写的手稿在MB。洛杉矶的指导下导致了实验的设计和执行。点分离和鉴定真菌用于这项工作。FN协调主项目。MB的构思和设计和协调。所有作者的手稿和批准提交的版本。

资金

这项工作是支持由联邦地区研究支持基金(FAPDF - 0193.000977/2015)过程,国家科学和技术发展委员会(CNPq),科学、技术、创新和通信(MCTIC)和国家科学技术发展基金(FNDCT -过程407851/2013-5 - Pro-Centro-Oeste研究和研究生网络)。这项研究的部分经费由Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de含量优越——巴西(披肩)——财务代码001。

的利益冲突

作者声明,这项研究是在没有进行任何商业或财务关系可能被视为一个潜在的利益冲突。

出版商的注意

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