RNAi验证嗅觉缺陷的一个重要生物防除代理Agasicles hygrophila(鞘翅目:叶甲科)关于交配和主机分配
小玉宁
丛黄
长虹东4,
Jisu金
西桥
Wanqiang钱
Fanghao广域网- 1植物保护学院重点实验室绿色热带植物病虫害防治,教育部,海口,海南大学,中国
- 2深圳分公司、广东岭南现代农业的实验室,基因组分析实验室的农业和农村事务部、农业基因组学研究所深圳、中国农业科学院、中国深圳
- 3中国农业科学院植物保护研究所,北京,中国
- 4实验室昆虫行为和进化生态学、生命科学与技术学院,中南林业科技大学(CSUFT),长沙,中国
鳄鱼杂草其中,、是一种多年生,全球有害的杂草。甲虫Agasicles hygrophila被认为是一个经典的生物制剂用于控制答:、。昆虫嗅觉系统外围,有气味的受体受体(ORco)中扮演一个重要的函数对气味的感知的昆虫。然而,ORco host-finding和交配行为的功能答:hygrophila仍不清楚。在这项研究中,我们有气味的受体受体的特征答:hygrophila(AhygOrco)。实时定量PCR(存在)显示AhygOrco主要表达在天线的成年男性和女性,男性和女性的天线之间的区别并没有意义。核糖核酸干扰(RNAi)结果表明,控制相比,注入AhygOrco极强烈的表达减少AhygOrco90%的男性在雌性甲虫甲虫和89%。的mate-seeking和摄食行为AhygOrco沉默甲虫被显著地抑制。男性成年人更成功地找到一个伴侣与对照组相比。此外,主机分配能力的方向答:、成年人明显压抑。这些结果表明,AhygOrco与答:hygrophila喂养和mate-seeking抑制AhygOrco表达式是减少主机的原因之一,在交配答:hygrophila。与此同时,这项研究提供了支持基于RNAi探索基因功能。
1。介绍
几乎所有的动物应对信息素和其他化学信号(Suh et al ., 2014)表明食物、住所和捕食者,它们严重依赖于嗅觉系统来实现这一过程(怀亚特,2003)。天线的主要嗅觉结构在鳞翅目和唇瓣。气味中检测到这些结构主要通过化学感应受体,属于嗅觉受体(ORs)和ionotropic受体家族(IRs)膜蛋白(拉尔森et al ., 2004;本顿,2006;本顿et al ., 2009)。这些受体离子通道ligand-gated形式在活的有机体内,可以表达不同的异源表达系统,以研究他们的角色(佐藤et al ., 2008;湿草地et al ., 2009;凯里et al ., 2010;王et al ., 2010)。
昆虫口服补液盐是一个大的基因家族,这被认为是主要的受体家族参与嗅觉功能(张和Lofstedt, 2013年;Koenig et al ., 2015)。这些基因在昆虫类群相对较低的序列相似度(Krieger et al ., 2003;汉森和Stensmyr, 2011;张和Lofstedt, 2015年)。一个特定类的口服补液盐叫做气味受体共受体Orco)。Orco基因是高度保守的,在大多数昆虫是同源的。昆虫使用嗅觉受体来区分成千上万的挥发物或信息素(Hallem卡尔森,2006)。嗅觉识别的过程中,需要一个特定的或普遍Orco蛋白一起形成Orco-OR受体复杂功能四聚物ligand-gated离子通道功能锻炼(Vosshall和汉森,2011年;中川et al ., 2012;Kumar et al ., 2013;Missbach et al ., 2014;特纳et al ., 2014)。
研究探索的结构和功能Orco一直不间断,最近的一些研究表明,结构完整性的Orco影响昆虫的频道活动Orco-OR复杂(尼科尔斯Luetje, 2010;琼斯等人。,2011年;尼科尔斯et al ., 2011;中川et al ., 2012)。颠覆性的表达异常Orco显著影响昆虫的嗅觉功能(赵et al ., 2011;刘et al ., 2017)。Orco突变使得各种昆虫失去嗅觉气味(德根那罗et al ., 2013;Koutroumpa et al ., 2016;李et al ., 2016;燕et al ., 2017),突变也完全扰乱了物种的摄食行为(Fandino et al ., 2019)。此外,一些研究已经表明Orco通常是相关的组织参与产卵,交配,开发、阻力和代谢调节(Libert et al ., 2007;加藤Touhara, 2009;风扇et al ., 2015;Trible et al ., 2017;太阳et al ., 2020)。
Agasicles hygrophila塞尔玛和沃格特(鞘翅目:叶甲科)原产于巴西和阿根廷北部和南部被认为是生物防治剂其中,、(集市)。Griseb(石竹目:苋科;陆et al ., 2010)。1964年之后,答:hygrophila被介绍给美国,澳大利亚,新西兰,泰国的生物控制答:、,取得了巨大的成功。中国科学家介绍了甲虫从美国1986年,评估宿主特异性和得出结论,昆虫可以安全地使用在中国,紧随其后的是大量饲养和释放,生物特征和评价其控制效果。独家主机识别能力,能够准确地找到主机领域复杂odorscape(下Conchou et al ., 2019)。然而,主机识别的分子机制答:hygrophila尚不清楚。在目前的研究中,我们发现和克隆了Orco基因的答:hygrophila。后来,AhygOrco由RNAi沉默突变体是由主机和交配行为测试行为测试。这项研究partialy澄清了AhygOrco函数答:hygrophila和嗅觉机理的进一步研究奠定了基础答:hygrophila。由于其特异性和高效,RNAi吸引了来自生物学家的广泛关注,成为分子生物学的研究热点之一。SiRNA-mediated基因沉默扮演关键的角色昆虫基因功能的研究。
2。材料和方法
2.1。昆虫饲养
Agasicles hygrophila得到的植物保护研究所、中国农业科学院。甲虫被饲养答:、植物26岁±1°C 85%相对湿度(RH)和十六h(白光:深色)在实验室中光周期。培育三代跳蚤甲虫前消除产妇影响的实验。
2.2。RNA提取,互补脱氧核糖核酸的合成,基因克隆
分析天线的总RNA提取30答:hygrophila使用微总RNA提取工具(剑士生物技术,北京)后,制造商的协议。的第一链互补DNA合成(互补)从1使用Hifairμg总RNA®三世第一链cDNA合成装备(Yeasen生物科技、上海、中国)根据制造商的协议。合成的互补是储存在−20°C到使用。识别AhygOrco简并引物的序列,三双(AhygOrcof1: 5′-TTGTGGAAATCCAGTGAGTCTGC-3′,AhygOrcor1: 5′-CGGCCACCCGGTATAGTATTTAG-3′,AhygOrco- f2: 5′-ATGATGAAATTTAAGGTATCTGGTCTAGTGGC-3′,AhygOrcor2: 5′-GAAAAAACTGTTGTAGTGACCACGCA-3′,AhygOrcof3: 5′-TAAGGCTTATGCAAGCTTCTGGACA-3′,AhygOrcor3: 5′-TAGGTAATAAGGCATTCCAGACATAGCG-3′,表1)是为了扩大核酸序列使用2×Hieff Canace®黄金PCR反应混合液(Yeasen生物科技、上海、中国)。热后下的放大执行计划:98°C 3分钟,35周期在98°C 10年代,55°C 20年代和72°C 45 s,紧随其后的是1在72°C循环5分钟。PCR产物纯化使用DNA凝胶萃取设备(Beyotime生物科技、上海、中国),克隆到一个pClone007多才多艺的简单向量(Tsingke生物科技、北京、中国)使用Trelief™5α化学感应细胞(Tsingke生物技术,北京)和测序。
表1。设计引物PCR的列表AhygOrco克隆、存在和dsRNA syn-thesis。
2.3。生物信息学分析
寻找直接同源的AhygOrco使用爆炸了。1多序列比对AhygOrco和其他四个直接同源甲虫类之昆虫昆虫与DNAMAN软件执行。的跨膜域和拓扑推断AhygOrco使用TMHMM蛋白质预测。2的氨基酸序列AhygOrco从其他昆虫及其直接同源对齐使用ClustalW方法实现在大型X软件包。构建了系统发育树neighbor-joining (NJ)方法(斋藤和Nei, 1987年)与P-distance建模(Nei库马尔,2000使用大型X)和空白的部分删除软件包(Kumar et al ., 2018)。树结构的可靠性评估使用引导过程是基于1000年复制。的Orco氨基酸序列的昆虫中列出附录B。
2.4。表达分析AhygOrco
的表达谱AhygOrco分析了使用中存在。总RNA分离出12种不同的组织,包括男性和女性的天线(一个),男性和女性的头没有天线(H),男性和女性的腹部(AB),女性卵巢(OV),男性睾丸(TE),男性和女性的胸腔(T),男性和女性的腿(L),获得原始成年甲虫的48小时内的男女成人羽化。总RNA提取的方法和上面描述的一样。每个RNA样本标准化的浓度500 ng /μl,和互补脱氧核糖核酸合成使用Hifair®三世第一链cDNA合成SuperMix qPCR工具包(Yeasen生物科技、上海、中国)根据制造商的协议。基于研究其他鞘翅目(张y . et al ., 2021),核糖体蛋白L13a(RPL13a;贾et al ., 2020)是作为内部控制在目前的研究。中存在测试的触角cDNA稀释10倍。执行中存在使用ABI StepOne +(美国马热科学、沃尔瑟姆)与Hieff®qPCR SYBR绿色主人混合(Yeasen生物科技、上海、中国)。反应项目设置如下:5分钟在95°C, 40周期在95°C 10年代和60°C 30年代,和20年代在72°C。中存在的引物设计使用底漆总理5.0(总理Biosoft国际;AhygOrco-RT-F: 5′- TGTACAACACGAGGCAAGAAATGGG-3′,AhygOrco-RT-R: 5′- TCCAACACCTCCACCACCTTGAC-3′,RPL13a- f: 5′- GAAGCGAGTAGTT-GTGCCTG-3′,RPL13a- r: 5′-TGCGAACGACTGTCTGGTAT-3′,表1),底漆之前验证基因表达的效率分析。每个使用两种技术复制和执行中存在三个生物复制。的表达水平AhygOrco计算了2−ΔΔCt方法(Livak Schmittgen, 2001)。
2.5。dsRNA合成、显微镜下注射和存在验证
基于互补脱氧核糖核酸模板,一对引物(萨利赫et al ., 2006;小2014;王2019年)包含T7 RNA聚合酶启动子(dsOrco- f: 5′- TAATACGACTCACTATAGGGCTGCCATAGGA-GATGCTTATGGTG-3′, dsOrco- r: 5′- TAATACGACTCACTATAGGGAGCTTCTTCG-GAGCCATCGT-3′,表1)是放大使用2×Hieff Canace®黄金PCR反应混合液(Yeasen生物科技、上海、中国)。热后下的放大执行计划:98°C 3分钟,35周期在98°C 10年代,55°C 20年代和72°C 45 s,紧随其后的是一个周期在72°C 5分钟。使用引物PCR扩增后,获得目标片段被用来合成dsOrco与T7 RNAi转录工具包(Vazyme生物科技、南京、中国)根据制造商的指示。此外,dsRNA增强型绿色荧光蛋白(dsEGFP的序列EGFP所示附录Ads的引物EGFP所示表1基因库acc。不。:MN830806.1)也是合成控制治疗。合成ds的浓度Orco和dsEGFP被稀释10μg /μL和储存在−20°C到使用。新出现的答:hygrophila被分为雄性和雌性甲虫和用于RNAi显微镜下注射。新出现的答:hygrophila男性成人(羽化后12小时内)放在腹部朝上的软塑料盘。然后,0.1μl dsOrco或dsEGFP注入结网站之间的第一个和第二个腹段每个使用R480 Pico-Injector (RWD生命科学有限公司、深圳、中国)。注射后,昆虫被允许在塑料盒中恢复过来答:、。经过48小时的注入,天线被抓住了镊子的根天线,随后被转移到1.5毫升离心管。总RNA提取和mRNA水平验证的方法进行如上所述。
2.6。行为测试后RNAi
在喂养行为测试。经过48小时的注入,ds的昆虫Orco又和dsEGFP又组分别转移到一个正方形的一边塑料盘(10×10×1.7厘米,图1一个)。在此之前,一个新鲜的叶子答:、被放在对面的菜。介绍昆虫的时间成功叶联系测量。如果昆虫未能接触到叶在2分钟内,它被认为无法识别喂养(刘et al ., 2016)。昆虫没有位置移动在2分钟内被抛弃。进行行为测试每个单独的一个接一个。和偏好寄主叶片的数量在一群30个人的性别统计计算成功率(SR)、数量(N)的偏好寄主叶甲虫SR =总额的一小部分N/ 30。实验重复三次,以避免随机误差,因此,总共有90个人的性别。完成测试后,这道菜是用75%乙醇洗净。整个生物进行白色灯光下26岁±1°C和85%相对湿度。
图1。(一)在喂养行为测试装置。(B)在择偶行为测试装置。测试昆虫放置在灰色的起源。
在mate-seeking行为测试。经过48小时的注入,ds的昆虫Orco又和dsEGFP又组分别转移到一个正方形的一边塑料盘(10×10×1.7厘米,图1 b)。在此之前,一个未配对的成年女性羽化后(3 d)是固定的对面这道菜用双面胶带。引入的时间成功的雄性昆虫接触女性的身体测量。如果昆虫未能接触异性的身体在60年代,它是判断无法认识到交配。如果昆虫不能触碰女性的身体在60年代,它是判断无法认识到交配。昆虫没有位置移动在60年代被抛弃。在每一对行为进行了测试答:hygrophila一个接一个,数量和时间由男性成功发现女性在一群30双计算答:hygrophila。此外,成功率(SR)计算的一小部分男性成功发现女性的数量(N)的总数雄性甲虫SR =N/ 30。为了避免随机误差,实验重复了三次。总共90双答:hygrophila被用来在mate-seeking行为测试。完成测试后,这道菜是用75%乙醇洗净。整个生物进行白色灯光下26岁±1°C和85%相对湿度。所有的17:00-19:00行为进行了测试,当昆虫是最活跃的。
2.7。数据分析
在喂养行为测试,ds的SROrco又昆虫是规范化的SR dsEGFP又女性。mate-seeking行为测试,ds的SROrco又昆虫是规范化的SR dsEGFP又昆虫。所有数据都表示为意味着±sem(平均数标准误差)。在IBM SPSS统计分析进行统计27。AhygOrco的表达分析在不同的组织,不同样本间的显著差异(包括男性和女性)进行了分析使用单向方差分析(方差分析)图基的紧随其后事后测试。统计测试的相对表现AhygOrco和老主人喂养以及mate-seeking ds之间Orco又昆虫和dsEGFP又昆虫,我们进行了非参数测试(Mann-Whitney U测试)对男性和女性,分别。是水平的意义p< 0.05。数据构造使用GraphPad棱镜8(美国GraphPad软件,拉霍亚,CA)和Adobe Illustrator CS6(美国加利福尼亚州圣何塞Adobe,)。
3所示。结果
3.1。标识、序列分析和表达分析AhygOrco
AhygOrco信使rna,卵巢中转录组(未发表的数据)答:hygrophila。基于互补脱氧核糖核酸模板和特定的引物PCR,AhygOrco基因克隆成功(的顺序AhygOrco所示附录A基因库acc。不。:OP972585)。完整的开放阅读框(ORF)长度是1440个基点,编码479个氨基酸。跨膜的预测结果表明,AhygOrco有七个假定的跨膜区域,与细胞膜内的n端和糖之外,类似于一个典型的昆虫或(图2一个,B)。Orco来自八甲虫类之昆虫昆虫的基因用于执行多重序列比对。的身份AhygOrco与Orco直接同源的其他昆虫在85% - -95%的范围(表2)。膜的拓扑分析AhygOrco蛋白质预测TMHMM2.0表示,这种蛋白质是一种七跨膜蛋白的胞内n端和一个胞外糖基(图2 b),这是与膜拓扑一致Orco蛋白质在l .长庚星(船体et al ., 2012),d .腹,冈比亚按蚊(本顿et al ., 2006)。
图2。(一)多序列比对的AhygOrco推导的氨基酸序列与其他Orco从七鞘翅目昆虫(Ocom:Ophraella communaCbow:Colaphellus bowringi水:Ambrostoma quadriimpressumTmol:Tenebrio莫利托射频:Rhynchophorus ferrugineus很抱歉:Sitophilus oryzae断言:Asbolus verrucosus)。跨膜域I-VII用红线表示。(B)跨膜螺旋的预测编码的氨基酸序列。
表2。百分比之间的身份AhygOrco和Orco在其他昆虫直接同源。
使用40昆虫系统发育树的构建Orco蛋白质序列。树是由大型X基于ClustalW对齐。引导值是根据1000年的复制。分支长度成正比的比例序列差异(不同规模的酒吧,0.05%)。结果显示一个非常高水平的保护和之间的关系Orco子类型中昆虫订单(图3)。RT-qPCR分析是用来确定的相对表达水平AhygOrco在不同的成年组织。结果表明,AhygOrco在男性和女性的天线高度表达,转录水平明显高于其他组织(至少超过200倍),其次是腹部(图3)。其余组织有极低的表达式。然而,的差异AhygOrco男性和女性之间的水平天线不显著(图4)。
图3。Neighbor-joining树Orco从不同的昆虫直接同源。引导支持值基于1000复制表示。分支长度成正比的比例序列差异(不同规模的酒吧,0.05%)。的AhygOrco序列是红框所示。的Orco氨基酸序列的昆虫中列出附录B。加入基因库中列出了其他序列的数量表2。
图4。表达分析AhygOrco男性和女性的不同组织的甲虫。表达式褶皱的变化都与男性的腿。安:天线,H:正面没有天线,阿瑟:腹部、OV:女性卵巢,TE:男性睾丸,T:胸腔,李:腿。酒吧与相同的字母不显著不同的p< 0.05基于图基的测试水平。每个点代表的意思是(n= 3)±SEM。(F11日24= 9752.504,p< 0.001)。
3.2。表达式的分析OrcoRNAi后
48小时后(马et al ., 2020;田et al ., 2022)击倒,我们验证了RNAi ds的效率Orco中存在。的表达水平AhygOrco基因在ds显著降低Orco又比ds甲虫EGFP又甲虫(dsOrco又:男,p< 0.0001,女,p< 0.0001),可拆卸的水平达到90%男性和89%女性(图5一个)。
图5。(一)的验证AhygOrcods的转录水平Orco又和dsEGFP又答:hygrophila。的转录水平AhygOrco是归一化RPL13a控制基因。标有不同字母的值明显不同基于Mann-Whitney U测试(男:Z=−1.964,p< 0.05;女:Z=−1.964,p< 0.05)。数据提出了均值±SEM (n = 3)。(B)个人成功的百分比答:、在2分钟之内。(Mann-Whitney U测试,男:Z=−1.993,p< 0.05;女:Z=−1.993,p< 0.05)。(C)人成功地找到了一个伴侣的比例在60年代。(Mann-Whitney U测试,Z=−1.993,p提出了均值(< 0.05)数据n= 3)±SEM。(D)这些人花了搜索的时间。dsEGFP、昆虫注射dsRNA反对EGFP。dsOrco、昆虫注射dsRNA反对AhygOrco。
3.3。击倒的AhygOrco损害喂养和寻求交配
研究沉默的影响Orco在主机和伴侣识别、行为来进行生物。结果表明,host-seeking的行为AhygOrco沉默显著抑制了男性和女性,只有30%的女性和27%的男性寻找宿主在2分钟内,显著低于dsEGFP又男性(图5 b)。与此同时,host-seeking行为AhygOrco沉默雄性显著抑制,只有47%的男性寻找配偶在60年代,这明显低于昆虫注射dsEGFP(图5 c)。此外,对于那些成功地发现了一个主机的昆虫,ds的显著减少Orco又组织能够找到比ds主机在60年代EGFP又集团(dsEGFPds: 69%,Orco:37%,图5 d)。
4所示。讨论
在目前的研究中,我们coreceptor嗅觉受体基因的特征AhygOrco的答:hygrophila。AhygOrco有七个战区导弹防御系统,一个N在- c出拓扑结构和一个高度保守的c端结构域,所预测的Orco氨基酸序列比较和TMHMM程序。详细TMHMM过程的预测结果表明,该拓扑结构AhygOrco的拓扑结构是一致的吗Orco其他昆虫的7 tmd (Mombaerts 1999;Butterwick et al ., 2018)。本地化在质膜,氨基端位于细胞内c端位于细胞外。N在- c出拓扑是用来形成独特的Orco-OR复杂的结构,这是一个heteromeric ligand-gated离子通道(佐藤et al ., 2008;Touhara 2009;湿草地et al ., 2009)。与其他已知的离子通道家族,这种受体与G蛋白耦合(没有联系智能et al ., 2008)。这种离子通道是独一无二的昆虫来应对气味环境(本顿,2006;Touhara Vosshall的,2009)。通过多个昆虫的种系发生树Orco,我们发现7个昆虫Orco高的相似AhygOrco对氨基酸序列比较。有大量的氨基酸序列在c端地区相同的其他昆虫。这一发现与先前的发现是一致的,它是假设这个高度的序列保护本地区的对应于一个特定的函数(Krieger et al ., 2003;Malpel et al ., 2008)。
的表达AhygOrco在天线高出200倍,在身体的其他部位,这并不令人惊讶的考虑在嗅觉功能(梅洛et al ., 2004;皮特et al ., 2004;张x f . et al ., 2021)。此外,的表达AhygOrconon-olfactory组织中表明,他们可能也参与一些non-olfactory化学感觉的知觉过程,如Orco基因可以调节精子的激活埃及伊蚊(皮特et al ., 2014),臭虫(汉森et al ., 2014)。
RNAi技术正越来越多地用于探索基因功能和有更好的可拆卸的效率在鞘翅目(燕et al ., 2017)。在这个实验中,我们采用的交付方法注入dsRNA成年人的腹部,和RT-qPCR分析治疗后显示的表达水平AhygOrco基因在雄性和雌性都降低了近90% (贝当古et al ., 2002;科技界和Denell, 2004;Huvenne Smagghe, 2010)。这表明我们成功和有效地沉默AhygOrco由RNAi基因。
行为测试的结果显示,实验组注射dsOrco大大减少了响应答:、叶子相比对照组雌性和雄性。此外,dsOrco注入被发现显著损害配偶检测的能力答:hygrophila。上述结果提供的证据表明,镇压AhygOrco基因显著削弱主机和配偶检测的能力答:hygrophila。这表明,AhygOrco嗅觉系统中起着极其重要的作用,这是与以往的研究一致(拉尔森et al ., 2004;琼斯等人。,2005年;风扇et al ., 2015;林et al ., 2015)。沉默之后Orco,答:hygrophila仍然是主机所吸引,我们推测,还有其他途径答:hygrophila意义上的主机,如红外通道。目前关于口服补液盐之间的关系有两种可能途径和红外通道。一个是Zhang et al。(2019)发现Orco通路和国税局通路参与酸感应。另外,如Helicoverpa armigera,Orco通路缺陷不改变昆虫的反应酸(风扇et al ., 2022)。一个有趣的问题,未来的研究是Orco通路是否参与酸感应答:hygrophila随着美国国税局通路。
根据所需的反应时间答:hygrophila检测它的宿主,实验组注射dsOrco花了更多的时间比对照组。对于这样的结果,我们推测的作用答:hygrophila找到一个主机是由多个感官在一起。远程检测最初依赖嗅觉(或和红外通道),但其他线索,如视觉可以平等的参与。沉默AhygOrco延长a . hygrophila所需的时间来检测它的宿主,虽然它并不完全禁用找到宿主的能力。这是符合Balkenius研究(Balkenius et al ., 2009;Tateishi et al ., 2022)。这些事实证明AhygOrco是一个关键受体在吗答:hygrophila对昆虫嗅觉,或途径重要生活能够进行正常的生理活动和其他感官系统协同与嗅觉在未来应进一步明确。
数据可用性声明
最初的贡献提出了研究中都包含在这篇文章/补充材料,进一步的调查可以针对相应的作者。
作者的贡献
XN、CH和弗兰克-威廉姆斯的构思和设计整个研究。XQ,詹,WQ提供实验资源,XN和CD进行了实验,XN和CH分析数据,XN, CH, JJ, FC,弗兰克-威廉姆斯写道,修订后的手稿。所有作者的文章和批准提交的版本。
资金
本文的工作是国家重点支持的研究和发展项目的中国(2021 yfd1400100和2021 yfd1400101),深圳市科技计划(批准号KQTD20180411143628272)和农业科技创新项目。
确认
我们真诚感谢吴先生(羌族Wu)和王女士(Chenjiaozi Wang)的科学支持和各种类型的帮助。
的利益冲突
作者声明,这项研究是在没有进行任何商业或财务关系可能被视为一个潜在的利益冲突。
出版商的注意
本文表达的所有索赔仅代表作者,不一定代表的附属组织,或出版商、编辑和审稿人。任何产品,可以评估在这篇文章中,或声称,可能是由其制造商,不保证或认可的出版商。
补充材料
本文的补充材料在网上可以找到:https://www.雷竞技rebatfrontiersin.org/articles/10.3389/fevo.2023.1104962/full补充材料
脚注
引用
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关键词:Agasicles hygrophila、有气味的受体受体、RNA干扰交配识别,主人发现
引用:Ning X,黄C, C盾,金J,乔X,郭J,钱W,曹和Wan F (2023) RNAi验证嗅觉缺陷的一个重要的生物防除代理Agasicles hygrophila(鞘翅目:叶甲科)关于交配和主机分配。前面。生态。另一个星球。11:1104962。doi: 10.3389 / fevo.2023.1104962
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